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Acriflavine-Guanosine 복합제(AG60)가 Ehrlich 암세포를 이식한 생쥐 위점막 으뜸세포의 미세구조에 미치는 영향
고정식(Jeong-Sik Ko),왕종원(Jong-Won Wang),박경호(Kyung-Ho Park),박대균(Dae-Kyoon Park) 대한해부학회 2008 Anatomy & Cell Biology Vol.41 No.3
Ehrlich 종양세포를 이식한 후 AG60을 투여하였을 때, 위점막 상피세포의 형태학적 변화와 으뜸세포의 미세구조적 변화를 연구하고자 시행하였다. 실험동물로는 체중 25 g 내외의 성숙한 생쥐(ICR계통)를 정상대조군, 종양세포이식대조군(종양대조군), 종양세포 이식 후 AG60 투여군(AG60 투여군)으로 구분하였다. 종양대조군과 AG60 투여군 동물들은 샅부위 피하에 각각 1×107의 Ehrlich 종양세포를 이식한 후, 다음날부터 AG60은 30mg/kg을 격일 간격으로 투여했으며, 종양대조군은 종양세포이식 후에 약제 대신 0.2mL의 생리식염수를 피부밑조직에 주사하였다. 자기방사법적 관찰을 위해서는 AG60을 마지막으로 주사한 다음날 3H-thymidine 0.7 μCi/gm를 꼬리에 정맥주사하고, 70분 후 도살하여 위조직을 떼어내어 10% formalin에 고정하였다. 자기방사표본관찰은 위점막조직이 세로로 잘 절단된 부위를 택하여 점막근육판을 따라 점막길이 3.5 mm의 위점막조직에 분포하는 3H-thymidine 표지세포의 수를 계수하였으며, 일반조직 관찰을 위해서는 hematoxylin-eosin (H-E)염색을 시행하였다. 전자현미경 관찰을 위해서는 떼어낸 위조직을 2.5% glutaraldehyde-1.5% paraformaldehyde 혼합액 (Millonig’s phosphate buffer pH7.3)에 전고정하고, 1% osmium tetroxide 액(Millonig’s phosphate buffer pH 7.3)에 후고정한 후, 탈수과정을 거쳐 araldite 혼합액에 포매하였다. 일반조직관찰에서 종양대조군과 AG60 투여군은 위점막 조직에서 형태적으로 큰 변화를 볼 수 없었다. 자기방사법적 연구에서 정상대조군, 종양대조군, AG60 투여군은 점막길이 3.5 mm 당 출현하는 표지세포수가 각각 319.7±66.46, 343.7 ±47.72 및 102.3±54.99개이었다. AG60 투여군은 정상대조군과 종양대조군에 비하여 표지된 은입자의 수가 매우적어서 표지과립이 겨우 구별될 정도의 세포가 많이 관찰되었다. 전자현미경적 관찰에서 종양대조군과 AG60 투여군의 으뜸세포는 수초구조가 다소 많이 관찰되는 이외는 정상대조군에 비해 큰 차이가 없었다. 으뜸세포 사립체의 크기는 정상대조군, 종양대조군 및 AG60 투여군이 각각 0.86±0.364μm, 1.02±0.466 μm 및 0.92±0.390 μm이었고, 분비과립의 크기는 정상대조군, 종양대조군 및 AG60 투여군이 각각 0.74±0.208 μm, 1.18±0.291 μm 및 0.97±0.259 μm이었다. 이상의 결과를 종합해보면 Ehrlich 종양세포를 이식한 동물에 AG60을 반복 투여하면 위점막 상피세포의 DNA 합성을 효과적으로 억제하면서도 으뜸세포에는 미세구조적으로 큰 손상을 주지 않았으므로 AG60은 위장장애가 적으면서도 항암효과가 좋은 약제라고 생각된다. This experiment was performed to evaluate the morphological responses of the gastric epithelial cells and the gastric chief cells of the mouse inoculated with Ehrlich carcinoma cells in the inguinal area following administration of acriflavine-guanosine composition (AG60). Healthy adult ICR mice were divided into normal and experimental groups. In the experimental groups, each mouse was inoculated with 1×107 Ehrlich carcinoma cells subcutaneously in the inguinal area. The day following the 7th injection of saline or AG60, each mouse was injected with methyl-3H-thymidine through tail vein. Seventy minutes after the thymidine injection, gastric tissues were taken and fixed in 10% buffered neutral formalin. Deparaffinized sections were coated with autoradiographic emulsion EM-1 and dried, and then placed in a light-tight box. The number of labeled epithelial cells in the gastric mucosae were observed and calculated. And for electron microscopic observation, gastric tissues were prefixed with 2.5% glutaraldehyde-1.5% paraformaldehyde solution, followed by post-fixation with 1% osmium tetroxide solution. The ultrathin sections were stained with uranyl acetate and lead citrate. The size of zymogen granules and mitochondria in the gastric chief cells were observed and calculated. On the autoradiographic study, number of labeled cells in the area of 3.5 mm width (6μm thickness) of mouse gastric mucosae of normal control, tumor control and AG60-treated groups were 319.7±66.46, 343.7±47.72 and 102.3±54.99 respectively. On the electron microscopic study, the size of zymogen granule in the gastric chief cells of normal control, tumor control and AG60-treated groups were 0.74±0.208 μm, 1.18±0.291μm and 0.97±0.259 μm, respectively. And the mitochondrial size of the gastric chief cells of normal control, tumor control and AG60-treated groups were 0.86±0.364 μm, 1.02±0.466 μm and 0.92±0.390 μm, respectively. And in the AG60 treated group, most chief cells did not show any difference in ultrastructure, except that myelin figures were more frequently observed, in comparison with that of nornmal control group. From the above results, AG60 may suppress the DNA synthesis of the gastric epithelial cells, but does not results severe fine structural defect on the gastric chief cells. These results suggest that AG60 is expected as one of the most effective anticancer drugs.
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