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- 저자 : 강선철 ( Cher Won Hwang (검색결과 6 건)
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살충성곰팡이 Metarhizium anisopliae의 ura5 유전자의 분리동정
박인철,이동규,강선철,황철원,Park, In-Cheol,Lee, Dong-Kyu,Kang, Sun-Cheol,Hwang, Cher-Won 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.43 No.1
환경친화형 생물농약개발을 위한 방안의 일환으로, 벼별구 등 농해충병원사상균 Metarhizium anisopliae의 분자생물학적 육종을 위해 영양요구성 돌연변이를 상보하는 선택유전자, ura5 (Orotate phosphoribosyl transferase)를 cloning하였다. Cloning방법으로는 기존에 알려진 사상균의 ura5 유전자들간에 확인된 상보성 염기배열을 합성하여, 이것을 primer로 사용하여 PCR기법에 의해 부분적으로 cloning하였다 또한, PCR기법에 의해cloning된 uras유전자단편의 염기배열을 결정한 결과, Trichoderma resei의 ura5유전자와는 아미노산수준에서 약 85%의 상동성을 나타내었으며, 이 단편을 이용하여 Metarhizium anisopliae의 genomic library로 부터 ura5유전자가 포함된 약 4.4 kb의 DNA단편을 cloning 하였다. About 250 bp ura5 gene (Orotate phosphoribosyl transferase) fragment was cloned from genomic DNA of entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae by using PCR method. Entire nucleotide sequences of cloned DNA fragment were determined and analysed as compared with other fungus ura5 genes. The amino acid sequence deduced from the nucleotide sequence showed 85.5% homology to ura5 protein of Trichoderma reesei. Using this 250 bp PCR fragment we have isolated full ura5 gene of M. anisopliae by genomic Southern hybridization and the isolated 4.4 kb DNA fragments were mapped by restrictional enzyme.
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pBRG-4를 이용한 Metarhizium anisopliae의 형질전환
이동규,예완해,황철원,권석태,강선철,Lee, Dong-Gyu,Yeh, Wan-Hae,Hwang, Cher-Won,Kwon, Suk-Tae,Kang, Sun-Chul 한국응용생명화학회 1998 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.33 No.2
작물 병해충에 대한 무공해 미생물 농약 개발의 일환으로 곤충 병원성 곰팡이 Metarhizium anisopliae의 분자생물학적 육종을 위해 이 균주의 형질전환계를 확립하였다. M. anisopliae의 원형질체를 제작하여 benomyl 약제에 대하여 저항성을 나타내는 Aspergillus flavus 유래의 ${\beta}-tubulin$ 유전자를 갖는 pBRG-4 plasmid DNA를 polyethylene glycol 방법으로 형질 전환하였다. 이 형질전환은 pBRG-4 DNA $50\;{\mu}g$당 10개의 효율로 이루어졌으며, 그 결과 야생형 균주들의 $2.5\;{\mu}g/ml$ 농도의 benomyl 존재 하에서도 성장이 억제되는데 반하여 선발된 형질전환체들은 $5.0\;{\mu}g/ml$ 농도의 benomyl 함유 배지에서도 잘 성장하였다. 또한 이 형질전환체들의 chromosomal DNA를 분리하여 Southern 분석한 결과 ${\beta}-tubulin$ 유전자가 homologous recombination에 의하여 M. anisopliae의 genome속에 삽입 되었음을 확인하였다. We have established a transformation system for entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae, in order to develop mycoinsecticide by recombinant DNA techniques. Protoplasts of M. anisopliae would be transformed to a benomyl-resistant by introducing pBRG-4 plasmid DNA, which contains a ${\beta}-tubulin$ gene of Aspergillus flavus conferring resistance to benomyl and a pyr4 gene of Neurospora crassa, in the presence of 5% polyethylene glycol and 10 mM calcium chloride. Transformants occuring at a frequency of 10 colonies per $50\;{\mu}g$ pBRG-4 DNA grew on the $5\;{\mu}g/ml$ concentrations of benamyl, while the wild type was inhibited by $2.5\;{\mu}g/ml$. From the Southern analysis using genomic DNAs isolated from M. anisopliae transformants, the positive signals suggested that the ${\beta}-tubulin$ gene had integrated in the M. anisopliae genome by homologous recombination.
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pBRG-4 를 이용한 Metarhizium anisopliae 의 형질전환
이동규,예완해,황철원,권석태,강선철 ( Dong Gyu Lee,Wan Hae Yeh,Cher Won Hwang,Suk Tae Kwon,Sun Chul Kang ) 한국응용생명화학회 1998 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.41 No.3
We have established a transformation system for entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae, in order to develop mycoinsecticide by recombinant DNA techniques. Protoplasts of M. anisopliae would be transformed to a benomyl-resistant by introducing pBRG-4 plasmid DNA, which contains a β-tubulin gene of Aspergillus flavus conferring resistance to benomyl and a pyr4 gene of Neurospora crassa, in the presence of 5% polyethylene glycol and 10 mM calcium chloride. Transformants occuring at a frequency of 10 colonies per 50 ㎍ pBRG-4 DNA grew on the 5 ㎍/㎖ concentrations, of benamyl, while the wild type was inhibited by 2.5 ㎍/㎖. From the Southern analysis using genomic DNAs isolated from M. anisopliae transformants, the positive signals suggested that the β-tubulin gene had integrated in the M. anisopliae genome by homologous recombination.
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호알칼리성 Coryneform Bacteria TU-19의 형태적, 배양적 특성에 미치는 pH효과
최명철,양재섭,황철원,강선철,Choi, Myoung-Chul,Yang, Jae-Sub,Hwang, Cher-Won,Kang, Sun-Chul 한국응용생명화학회 1998 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.43 No.4
다양한 초발 pH에서 호알칼리성 Coryneform bacteria TU-19 균주를 배양하면서 이 균주의 형태적, 배양적 특성을 조사하였다. 그 결과 $pH\;9.0{\sim}10.0$의 초발 pH 범위에서 공시균주는 정상적인 성장을 보였으나 pH 12.0에서는 성장이 완전히 저해되었다. 흥미롭게도 본 균주는 배지의 초발 pH에 따라 균체의 형태적 변화가 관찰되었다. 즉 pH 8.0, 대수증식기에서 이 균은 길게 둘둘말린 filament 형태를 이루고 있었으나 최적 pH(10.0)에서는 한 개 혹은 두 개의 짧게 뻗은 rod 형태를 보였다. 또한 이 균은 $pH\;9.0{\sim}11.0$ 범위에서 배양할 경우 배양액의 최종 pH를 자신의 생육에 적합하도록 8.5 근처로 조절할 수 있음이 확인되었다. The morphological and cultural characteristics of alkalophilic Coryneform bacteria TU-19 were investigated at various pHs. This bacterium showed normal growth pattern at $pH\;9.0{\sim}10.0$, but the cell growth was completely inhibited at extreme pH (12.0 or more). Interestingly, at pH 8.0 the morphology of the bacterial cells seems to form convoluted filaments during the exponential growth phase while at pH 10.0, the optimal pH for the growth of this organism, the bacteria grew with variable paired or single forms, and straight rods during growth stages. Growing in alkaline media $(pH\;9.0{\sim}11.0)$, it adjusted the pH of the culture media to around pH 8.5 by itself.
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살충성곰팡이 Metarhizium anisopliae의 ura5 유전자의 분리동정
황철원,박인철,이동규,강선철 ( Cher Won Hwang,In Cheol Park,Dong Kyu Lee,Sun Cheol Kang ) 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.40 No.1
About 250 by ura5 gene (Orotate phosphoribosyl transferase) fragment was cloned from genomic DNA of entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae by using PCR method. Entire nucleotide sequences of cloned DNA fragment were determined and analyzed as compared with other fungus ura5 genes. The amino acid sequence deduced from the nucleotide sequence showed 85.5% homology to ura5 protein of Trichoderma reesei. Using this 250 bp PCR fragment we have isolated full ura5 gene of M. anisopliae by genomic Southern hybridization and the isolated 4.4 kb DNA fragments were mapped by restrictional enzyme.
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호알칼리성 Coryneform Bacteria TU-19 의 형태적 , 배양적 특성에 미치는 pH 효과
강선철,최명철,양재섭,황철원 한국농화학회 1998 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.41 No.5
The morphological and cultural characteristics of alkalophilic Coryneform bacteria TU-19 were investigated at various pHs. This bacterium showed normal growth pattern at pH 9.0∼10.0, but the cell growth was completely inhibited at extreme pH (12.0 or more). Interestingly, at pH 8.0 the morphology of the bacterial cells seems to form convoluted filaments during the exponential growth phase while at pH 10.0, the optimal pH for the growth of this organism, the bacteria grew with variable paired or single forms, and straight rods during growth stages. Growing in alkaline media (pH 9.0∼11.0), it adjusted the pH of the culture media to around pH 8.5 by itself.
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