High protein tyrosine kinase 7 (PTK7) expression associates with invasiveness of cholangiocarcinoma : PTK7 과발현이 담관암 침윤도에 미치는 영향

김청 서울대학교 대학원 2014 국내박사

Background and Objectives: Malignant transformation of cholangiocytes gives rise to cholangiocarcinoma. The incidence, prevalence, and mortality of intrahepatic cholangiocarcinoma are increasing worldwide. The high mortality and poor outcome of this disease are undoubtedly due to the lack of tools for its early diagnosis and treatment. Protein tyrosine kinase-7 (PTK7), a pseudokinase without detectable catalytic tyrosine kinase activity, is a relatively new member of the receptor tyrosine kinase (RTK) superfamily. The expression of PTK7 is up-regulated in many common human cancers, including colon, lung, and stomach cancers and acute myeloid leukemia. However, its expression in cholangiocarcinoma has not been studied. The present study aimed to explore the role of PTK7 in cholangiocarcinogenesis by evaluating the association between its expression and the behaviors of the cholangiocarcinoma cell lines and in human specimens. Materials and Methods: Six cholangiocarcinoma cell lines were initially used for the in vitro study. The mechanism studies were done using two cholangiocarcinoma cell lines, HuCCT1 and OZ, by cell proliferation, BrdU, RT-PCR, Western blot analysis, wound healing assay, transwell invasion assay, and Annexin V + PI-stained FACS analysis. HuCCT1 was an intrahepatic cholangiocarcinoma cell line, and OZ was an extrahepatic cholangiocarcinoma cell line. HuCCT1 cells express more PTK7 protein than OZ cells. To determine the function of PTK7 in the cholangiocarcinoma cell lines, siRNA was used to suppress PTK7 expression. An immunohistochemistry (IHC) analysis was also performed on the clinical samples. Results: The proliferation, DNA synthesis, invasion, and migration abilities were all stronger in HuCCT1 cells that had high PTK7 expression than in OZ cells that had low PTK7 expression. The knockdown of PTK7, with siRNA, in HuCCT1 cells resulted in impairment of the invasion, migration, and DNA synthesis abilities with the regulation of several cell-cycle-related proteins. It also induced cell apoptosis and decreased phospho-RhoA expression. PTK7 expression was higher in intrahepatic cholangiocarcinoma than in the non-tumorous liver. The patients with PTK7-negative IHC had a longer disease-free survival period than those with PTK7-positive IHC. Conclusions: A high level of PTK7 expression may play an important role in the proliferation, apoptosis and invasiveness of cholangiocarcinoma cells, and lead to a poor prognosis in affected patients. Thus, PTK7 may be used as a prognostic marker and the inhibition of PTK7 expression could possibly be a new therapeutic candidate for cholangiocarcinoma. 배경 및 목적: 담관암은 담관 상피세포의 악성 변화로 이루어진다. 간 내 담관암의 발생률, 유병률 및 사망률은 세계적으로 증가하고 있다. 이 질병의 높은 사망률과 나쁜 예후는 확실한 조기 진단 및 치료가 부족하기 때문이다. Protein tyrosine kinase-7 (PTK7)은 비교적 새롭게 알려진 receptor tyrosine kinase (RTK) 의 일종이다. PTK7은 결장, 폐, 위장, 급성 골수성 백혈병을 포함한 다양한 인체 암에서 발현이 높은 것으로 알려져 있다. 그러나 담관암에서 PTK7 발현에 대한 연구는 잘 알려져 있지 않다. 본 연구는 cholangiocarcinogenesis에서 PTK7의 역할을 규명하기 위해 시행되었다. 연구 대상 및 방법: 6 종류의 인체 담관암 세포중 침윤도가 다른 2개의 세포주인 HuCCT1 및 OZ을 이용해서 in vitro 실험을 시행하였다. 담관암 세포에 대한 PTK7의 역할을 알아보기 위해 MTT assay, BrdU용합, RT-PCR, Western blotting, wound healing, transwell 침윤, FACS 분석 및 siRNA을 이용한 PTK7발현 억제 실험을 시행하였다. 125명의 절제된 담관암 환자 샘플에 대한 PTK7면역 조직 화학 결과와 임상-병리학적 관련성도 알아보았다. 결과: PTK7발현이 높은 HuCCT1 세포가 낮은 OZ 세포에 비해 암세포 성장, DNA 합성, 이동능력 및 침윤도가 더 강했다. siRNA를 이용해 PTK7발현을 억제할 경우, 암세포의 성장과 침윤성이 현저히 감소하였고, PCP신호 전달계, 세포주기 및 자멸사 관련 단백질의 변화가 뚜렷하였다. 인체 담관암에서 PTK7발현이 높을수록 무병 생존 기간 및 전체 생존 기간이 짧았다. 결론: 이상의 결과들은 PTK7이 담관암 세포의 침윤성을 높여 불량한 예후인자로 작용할 가능성을 제시하였다. 따라서 PTK7은 환자의 예후를 예측할 수 있는 마커 및 새로운 분자 치료제 개발의 표적이 될 가능성이 큰 것으로 기대된다.

Risk factors for cholangiocarcinoma : synergism of hepatitis B virus infection and diabetes mellitus

이반석 Graduate School, Yonsei University 2014 국내석사

Purpose: Recent investigations have identified several risk factors, including hepatitis B virus (HBV) infection and diabetes mellitus (DM), for cholangiocarcinoma. However, the synergisms between these risk factors are not well known. This study was conducted to evaluate risk factors for cholangiocarcinoma and possible synergism between these factors. Materials and Methods: A hospital-based, case-control study in which we included 276 cholangiocarcinoma patients (193 extrahepatic cholangiocarcinoma [ECC] and 83 intrahepatic cholangiocarcinoma [ICC]), diagnosed between 2007 and 2013, and 552 healthy controls matched 2:1 for age, sex, and date of diagnosis. Risk factors for cholangiocarcinoma and possible synergism between those factors were evaluated using conditional logistic regression analysis and synergism index estimation, respectively. Results: There was an association between cholangiocarcinoma and HBV infection, DM, cholecystolithiasis, choledocholithiasis, and hepatolithiasis, with the adjusted odds ratios (aORs) of 4.1, 2.6, 1.7, 12.4, and 39.9, respectively. Synergistic interaction on the additive model was investigated between HBV infection and DM (aOR 12.2; 95% CI: 1.9?80.1). In the subgroup analyses, cholecystolithiasis, choledocholithiasis, hepatolithiasis, and DM were significant risk factors for ECC (aOR 2.0, 18.1, 14.9, and 2.0, respectively), whereas choledocholithiasis, hepatolithiasis, HBV infection, and DM were risk factors for ICC (aOR 8.6, 157.4, 5.3, and 4.9, respectively). Synergistic interaction was also observed between HBV infection and DM (aOR 22.7; 95% CI: 2.4?214.1). However, there was no synergistic interaction between other significant risk factors for cholangiocarcinoma. Conclusion: HBV infection and DM were found to exert independent and synergistic effects on the risk for cholangiocarcinoma, including ICC. Exploring the underlying mechanisms for such synergy may lead to the development of cholangiocarcinoma prevention strategies in high-risk individuals.

The Usefulness of Computed Tomography for Predicting Recurrence and Survival after Recurrence of Intrahepatic Cholangiocarcinoma : Hyeong Min Park

Park, Hyeong Min Kangwon National University 2020 국내박사

배경. 근치적 절제술 후 간내담관암의 재발은 빈번하고 재발 후 예후는 매우 암울하다. 이 연구는 전산화단층 영상에서 확인되는 간내담관암의 혈관성과 수술 후 재발 및 재발 후 예후와의 연관성에 대하여 연구하였다. 연구방법. 이 후향성 연구는 2001년 3월부터 2017년 7월 사이에 간내담관암에 대하여 근치적 절제술을 시행한 환자의 자료를 분석하였다. 전산화단층 영상에서 보이는 종양의 혈관성을 포함한 재발 및 무재발생존에 영향을 줄 수 있는 임상병리학적 인자들을 평가하였다. 또 한, 재발 간내담관암의 혈관성과 재발 후 생존 사이의 연관성에 대하여 분석하였다. 결과. 총 147명의 환자가 연구에 포함되었고 추적기간의 중앙값은 36.1 개월이었다. 101 (68.7%)명의 환자에서 간내담관암의 재발이 발생하였다. 간내담관암의 수술 후 무재발생존에 대한 다변량 분석에서 전산화단층 촬영의 동맥기에서 종양의 혈관성이 무재발생존의 독립 인자였다 (테증강 hazard ratio [HR] 3.893, 95% confidence interval [CI] 1.700-8.915; p = 0.0013; 저혈관성 HR 6.241, 95% CI 2.670-14.586, p <0.001). 재발 간내담관암의 혈관성은 재발 후 생존과 유의한 연관성을 보였다 (Log-rank p<0.001). 결론. 과혈관성 간내담관암은 다른 혈관성을 보이는 간내담관암보다 근치적 절제술 후 더 양호한 예후를 보인다. 따라서 전산화단층촬영 상 간내담관암의 혈관성은 비침습적이고, 접근성이 용이하며, 유용한 예후 지표로 간내담관암의 치료 계획 시 고려되어야 한다. Background. Recurrence of intrahepatic cholangiocarcinoma after resection is common and the prognosis is dismal. This study investigated the vascularity of intrahepatic cholangiocarcinoma on computed tomography images and its association with recurrence of intrahepatic cholangiocarcinoma following surgery, and with prognosis after recurrence. Methods. In this retrospective study, patients following curative resection of intrahepatic cholangiocarcinoma between March 2001 and July 2017 were reviewed. Clinicopathologic factors including tumor vascularity on computed tomography that could affect recurrence and recurrence free survival were assessed. In addition, the association between the vascularity of recurrent intrahepatic cholangiocarcinoma and the survival after recurrence was analyzed. Results. A total of 147 patients were enrolled and they followed-up for median 36.1 months. 101/147 patients (68.7%) experienced recurrence of intrahepatic cholangiocarcinoma. Vascularity on the late arterial phase of the computed tomography image was an risk factor for recurrence free survival (rim-enhanced image hazard ratio [HR] 3.893, 95% confidence interval [CI] 1.700–8.915, p = 0.0013; hypovascular image HR 6.241, 95% CI 2.670–14.586, p <0.001). In a subgroup that experienced intrahepatic recurrence, vascularity of the recurrent intrahepatic cholangiocarcinoma was significantly associated with survival after recurrence (Log-rank p < 0.001). Conclusion. Compared with others, hypervascular intrahepatic cholangio-carcinoma was associated with longer recurrence free survival and better prognosis after recurrence. Vascularity of intrahepatic cholangiocarcinoma on computed tomography may be a noninvasive, accessible, and useful prognostic index, and should be considered in treatment planning.

CD44 expression is associated with poor prognosis in patients with combined hepatocellular cholangiocarcinoma : 혼합형 간세포-담도암 환자에서 CD44의 발현양상과 예후와의 연관성

Ryounggo Kim 강원대학교 대학원 2015 국내석사

Backgrounds/Aims Combined hepatocellular cholangiocarcinoma is a rare type of primary liver cancer, which is thought to have a poorer prognosis than hepatocellular carcinoma. Cancer stem cells are associated with tumorigenesis, tumor progression, recurrence, metastasis, and poor prognosis in several malignancies including hepatocellular carcinoma. The aim of this study was to investigate the expression pattern of cancer stem cell markers in combined hepatocellular cholangiocarcinoma and hepatocellular carcinoma, and to evaluate whether this pattern correlated to patient prognosis. Methods Thirteen patients who underwent curative hepatic resection for combined hepatocellular cholangiocarcinoma and 13 patients who underwent curative hepatic resection for hepatocellular carcinoma (matched control cases) were included. Immunohistochemical staining for cancer stem cell markers (CK7, CK19, C-kit, CD44, CD133, and EpCAM) was performed and clinical outcomes were analyzed retrospectively. Results There was no significant difference in cancer stem cell marker expression between combined hepatocellular cholangiocarcinoma and hepatocellular carcinoma. In combined hepatocellular cholangiocarcinoma, the group that expressed CD44 showed earlier recurrence than the group that did not express CD44 (p = 0.040). Conclusions The expression of cancer stem cell markers in combined hepatocellular cholangiocarcinoma did not show a different pattern compared to that found in hepatocellular carcinoma. The expression of cancer stem cell marker CD44 was associated with poor prognosis in patients with combined hepatocellular cholangiocarcinoma. 배경 및 목적 혼합형 간세포-담도암은 원발성 간암 중 드문 암종의 하나로 일반적으로 간세포암에 비하여 나쁜 예후를 가진 것으로 알려져 있다. 최근 암줄기세포에 대한 연구에 따르면 암줄기세포의 발현은 암의 발현 및 진행, 재발, 전이 등에서 중요한 역할을 한다고 밝혀졌다. 원발성 간암에서 암줄기세포는 간세포암과 담도암 그리고 혼합형 간세포-담도암의 발현에 중추적인 역할을 하고 있는 것으로 추정되고 있다. 따라서 본 연구에서는 간세포암과 혼합형 간세포-담도암에서의 암줄기세포의 발현 양상을 살펴보고 이에 따른 예후와의 연관성을 살펴보고자 한다. 방법 간절제술 후 혼합형 간세포-담도암으로 진단받은 13명의 환자와 간세포암의 예후인자들을 1:1로 매칭시킨 간세포암 환자 13명을 대상으로 면역형광염색을 시행하였다. 면역형광염색은 cytokeratin(CK) 7, CK19, c-kit, CD44, CD133 그리고 EpCAM 을 이용하여 모든 환자의 병리검체에서 시행하였고 환자의 임상병리학적인 자료는 후향적으로 분석하였다. 결과 간세포암과 비교했을 때 혼합형 간세포-담도암의 암줄기세포의 발현양상에는 통계적으로 유의미한 차이가 없는 것으로 확인되었다. 하지만 혼합형 간세포-담도암으로 진단받은 환자 중 CD44 가 발현되는 군은 발현되지 않은 군에 비해서 통계학적으로 빨리 재발하는 것을 확인할 수 있었다. 결론 간세포암과 혼합형 간세포-담도암에서 암줄기세포의 발현양상은 차이가 없었다. 하지만 혼합형 간세포-담도암에서 CD44 의 발현은 환자의 재발에 있어 나쁜 예후인자이다.

Immunocell therapy with IL-2 gene-modified bone marrow stromal cells lead to growth inhibition of cholangiocarcinomas-bearing hamster model : 햄스터 담도암 모델에서 Interleukin-2 유전자 변형 골수 간질세포를 이용한 면역세포 치료의 효과

이상수 울산대학교 대학원 2004 국내박사

연구 배경 및 목적: 담도암은 담도의 상피세포에서 기원하는 악성 종양으로 전세계적으로 간에서 발생하는 악성종양 중 원발성 간세포암 다음으로 흔한 종양이다. 현재까지 5년 생존율을 향상시킬 수 있는 방법은 종양전체를 외과적으로 제거하는 근치적 절제술뿐이다. 하지만 대부분의 환자들은 진단 당시 이미 근치적 절제술의 대상이 되지 못하며, 단지 플라스틱 또는 금속 스텐트삽입 등의 고식적인 담도 배액술만을 시행 받게 된다. 또한 전신적 항암 화학요법이나 방사선 요법도 담도암 환자에서 생존율을 향상시키지는 못하고 있는 실정이다. 최근에 유전자 치료에 대한 여러 기대되는 연구들이 소개되고 있지만, 유전자를 선택적으로 종양세포에 전달할 수 있는 적절한 매개(vector) 가 없어 아직까지는 제한적으로 임상에 적용되고 있다. 한편 골수 간질세포(bone marrow stromal cell, BMSC)는 악성 종양의 치료에 있어 유전자 변형의 유용한 표적이 될 수 있다. 본 연구에서 저자들은 BMSCs를 표적으로 한 유전자 치료가 담도암에 효과가 있는지를 알아보고자 하였다. 햄스터 담도암 모델을 이용하여, interleukin-2(IL-2) 유전자를 변형한 BMSCs의 치료효과를 조사하였다. 연구 대상 및 방법: 햄스터(Syrian golden hamster)의 대퇴정맥을 통하여 KIGB-5 담도암 세포주(cell line) 5×10^(5)개를 정주하였다. 1주일 후 Ad/hIL-2를 포함한 BMSC, Ad/ΔE1을 포함한 BMSC, 조작을 가하지 않은 BMSC, 생리식염수(대조군)를 햄스터의 복강내에 주입한 후 12주간 관찰하였다. 연구 결과: 관찰기간 동안 Ad/hIL-2를 포함한 BMSC투여한 햄스터들은 모두 생존하였으며, 12주 후 희생하여 얻은 병리조직 소견에서 종양은 관찰되지 않았다. 반면에 나머지 세 군에서는 모두 4주째부터 폐에 미만의 전이성종괴들이 관찰되기 시작했고, 8주, 12주에는 전이성 종괴의 크기가 증가 하였다. 결론: IL-2 유전자 변형 골수간질 세포를 이용한 면역 세포치료는 햄스터 담도암모델에서 효과적이었다. 본 연구의 결과는 실제 담도암의 치료에 있어 IL-2 유전자 변형 골수간질 세포를 이용한 면역세포 치료가 향후 유망한 치료일 수 있음을 의미한다고 할 수 있으며 이에 대한 추가적인 연구가 필요하다고 생각한다. Background/Aims: Cholangiocarcinoma, a malignant tumor arising from bile duct epithelium, is the second most common primary liver cancer. At present, only surgical excision of all detectable tumors is associated with an improved five-year survival; however, most patients are not candidates for surgery and undergo only an endoscopic or percutaneous biliary drainage procedure utilizing plastic or metal stents. Systemic chemotherapy and radiation therapy have been ineffective in enhancing the survival in patients with cholangiocarcinoma. Despite many promising studies, gene therapy has limited clinical application because of the lack of suitable vector systems to enable selective gene transduction to tumor cells. Bone marrow stromal cells(BMSCs) can be an attractive target for genetic modification in the treatment of malignant diseases. The purpose of present study was to evaluate the efficiency of gene therapy targeted towards bone marrow stromal cells(BMSCs) can inhibit the development of biliary cancer. Using a biliary cancer cell-bearing hamster model, we investigated the therapeutic effects of IL-2 gene modified BMSCs. Materials and Methods: For preparation of cholangiocarcinoma bearing hamster model, 5X10^(5) cells of the KIGB-5 biliary cancer cell line were injected via the femoral vein of Syrian golden hamsters. One week later, the hamsters were injected intraperitoneally with BMSC containing Ad/hIL-2, BMSC containing Ad/ΔE1, unmodified BMSC, or no cells(control) and observed for 12 weeks. Results: All hamsters treated with BMSC containing Ad/hIL-2 survived, with no evidence of disease activity, during this period. In contrast, hamsters in the three other groups showed disseminated metastases involving the lungs as early as 4 weeks after the injection, and progressed to a wide-spread metastatic disease involving both lungs after 8 weeks. Conclusion: Immunocell therapy with BMSCs containing Ad/hIL-2 was effective in growth inhibition of cholangiocarcinoma in this hamster model. These findings suggest that immunocell therapy with IL-2 gene modified BMSCs may be a potential treatment modality for future clinical usage in cholangiocarcinoma.

간내 결석 환자에서 재발에 영향을 미치는 요인과 간내 결석 환자에서 담관암 발생의 위험 인자에 대한 연구

임은수 아주대학교 2015 국내석사

Background Hepatolithiasis causes recurrent cholangitis, biliary cirrhosis, and is an important risk factor for cholangiocarcinoma, which has a grave prognosis. Nevertheless, its intractable nature and high recurrence rate complicates treatment. Therefore, we investigated factors affecting recurrence of hepatolithiasis and factors affecting development of cholangiocarcinoma after treatment. Methods Medical records of total 159 patients in Ajou University hospital from 1995 to 2014 were reviewed and types of hepatolithiasis were classified according to Tsunoda classification. Factors affecting complete removal of hepatolithiasis, recurrence of hepatolithiasis and development of cholangiocarcinoma in hepatolithiasis patients were analyzed. Results The 159 patients consisted of 58 men and 101 women, with a mean age of 61.73 years. Median follow-up period was 53.69 months. Percutaneous transhepatic choledochoscopic stone lithotripsy (PTCS)and surgery were performed in 112 cases and in 34 cases, respectively. Peroral transpapillary endoscopic lithotripsy was also used in 3 patients and 10 patients were followed up without any treatment because of their comorbidities. Location of stones, treatment modality, Tsunoda classification, presence of liver atrophy, dilatation of stenosis during treatment and previous biliary surgery were not related to the possibility of complete stone removal in univariate and multivariate analysis. Recurrence rate was significantly different according to the location of stones, treatment modality, presence of liver atrophy, previous history of biliary surgery in univariate analysis. However, in multivariate analysis, previous history of biliary surgery was the only statistically significant factor. Patients who had undergone biliary surgery had 2.699 higher risk of recurrence than patients who had not. Cholangiocarcinoma was diagnosed in 7 (4.4%) patients. Four patients were diagnosed cholangiocarcinoma and hepatolithiasis simultaneously, and in the other three patients, cholangiocarcinoma developed during the follow-up period after treatment. Location of stones, Tsunoda classifications, previous history of previous biliary tract surgery, liver atrophy and complete stone removal were not related to development of cholangiocarcinomain multivariate analysis. Conclusion We could not find the factors related to the complete stone removal in this study. Recurrence rate was significantly different according to the previous history of surgery. Patients who had undergone biliary surgery have 2.699 higher risk of recurrence than patients who had not. No factor was associated with occurrence of cholangiocarcinoma. Lastly, patients with a history of biliary tract surgery should be followed up more closely and carefully for recurrence than patients who do not.

Effects and mechanisms of Flavokawain B in Cholangiocarcinoma cells

손준혁 서울대학교 대학원 2020 국내석사

Background: Cholangiocarcinoma is a devastating malignancy with limited treatment options and poor prognosis. Natural products have gained considerable attention for showing antitumor effects with less toxicities. Flavokawain B (FKB), such a natural product, has been studied for its antitumor effects in various cancers. However, the antitumor effect of FKB in cholangiocarcinoma has not been determined yet. This study was designed to investigate the therapeutic efficacy of FKB in cholangiocarcinoma. Methods: We investigated the effect of FKB on cell proliferation and apoptosis in a cholangiocarcinoma cell line, SNU-478. We examined whether the combination of FKB and cisplatin had an additional therapeutic effect. We also examined the mechanisms responsible for the effect of FKB. And we investigated the effect of FKB in xenograft model using nude mice. Results: FKB was found to inhibit cell proliferation of cholangiocarcinoma cells in a dose and time-dependent manner. FKB also induced cellular apoptosis additively in combination with cisplatin. Expressions of Akt and P-Akt were down-regulated by FKB. In the xenograft model, FKB treatment in combination with cisplatin/gemcitabine significantly inhibited tumor growth of SNU-478 cells. Conclusion: FKB showed antitumor effect through apoptosis induction by suppressing Akt and P-Akt activity in cholangiocarcinoma, but the synergistic effect of FKB and cisplatin was not definite. 배경: 담관암은 치료 방법이 제한적이며 예후가 매우 좋지 않은 치명적인 악성종양이다. 자연에 존재하는 천연물 중 암 예방 효과 및 항암 효과가 있다고 알려진 물질들은 상대적으로 독성이 적으며, 기존의 항암제와 병합 사용시 항암 효과를 증대 시킬 수 있다고 알려져 있어 주목을 받고 있다. Flavokawain B 는 천연 화합물로 다양한 종양에서 항암 효과를 보인다고 알려져 있다. 하지만 아직까지 담관암에서 flavokawain B 의 항암 효과에 대해서는 잘 알려진 바가 없다. 본 연구는 담관암에서 flavokawain B 가 항암 효과에 미치는 영향에 대해서 연구해 보고자 하였다. 방법: 담관암 세포주 (SNU-478)에 flavokawain B 를 투여하여 세포 증식 및 세포자멸사에 미치는 영향을 측정하였다. Cisplatin 에 flavokawain B 를 병합 투여하였을 때 세포 증식 및 세포자멸사에 미치는 영향에 대해 알아보았다. 또한 flavokawain B 의 항암 효과를 일으키는 기전을 살펴보기 위하여 관련된 단백질의 발현의 변화를 측정하였다. 담관암 동물 모델에서도 flavokawain B 의 종양 억제 효과와 기전을 측정하였다. 결과: 담관암 세포주에서 flavokawain B 의 투여는 용량 및 시간 의존적 방식으로 담관암 세포 증식을 억제하는 효과를 보였다. Flavokawain B 의 투여에 의해 Akt 와 P-Akt 의 발현이 저하되었다. 담관암 동물 모델에서 flavokawain B 와 cisplatin / gemcitabine 의 병합 투여는 SNU-478 세포의 종양 성장을 유의하게 억제하였다. 결론: 담관암에서 Flavokawain B 는 Akt 와 P-Akt 를 억제함으로써 항암효과를 보였다. 하지만 flavokawain B 와 cisplatin 의 병합 요법은 뚜렷한 항암효과의 증진을 보이지는 못하였다.

시스플라틴 내성 담도암 세포주에서 EMT 및 세포 이동과 침윤을 촉진하는 L1CAM과 Axl

Kim, Haejung Kangwon National University 2018 국내박사

담도암은 조기 진단과 치료가 어려운 악성 종양으로 화학적 약물 치료에 강한 내성을 가지고 있다. 암의 경우 항암제 내성 획득방법에서 다양한 이질성을 나타나게 된다. 이러한 항암제 내성 담도암세포에서 epithelial-mesenchymal transition (EMT)가 일어난다는 임상학적 보고가 있었으며, 이는 환자의 예후와도 연관되어 있음이 보고되고 있다. 이에 따라 EMT를 타켓으로 한 치료제 개발이 진행되고 있다. 시스플라틴은 담도암 치료에 사용되는 대표적인 화합물로 여러 암에서 시스플라틴에 대한 내성을 나타내는 암세포에서 EMT가 촉진된다는 연구가 진행된 반면 담도암에서는 그에 관한 연구가 없었다. 따라서 본 연구에서는 장기간 시스플라틴을 pulsed exposure 방법으로 처리하여 얻어진 시스플라틴 내성 담도암 세포에서 EMT에 관련된 유전자들의 발현을 RNA-seq을 통해 확인하였고, 그 결과 시스플라틴 내성 담도암 세포에서 EMT가 촉진된 것을 확인하였다. L1CAM은 유방암, 난소암등에서 EMT가 촉진됨에 따라 발현이 증가 되고 이로 인해 세포의 이동과 침윤이 증가된다는 보고가 있었다. 시스플라틴 내성 담도암세포에서도 L1CAM의 발현이 증가된 것이 보고된 바는 있지만 세포의 이동과 침윤에 한 연구는 진행된 바가 없다. Axl은 cell adhseion을 조절하여 EMT에 의한 암의 전이에 관여한다는 보고가 있었으며, 여러 암에서 발현이 증가되어 있다는 것이 보고되었다. 그러나 담도암 세포에서 Axl에 관한 직접적인 연구는 보고된바가 없다. 따라서 본 연구에서 개발한 시스플라틴 내성 담도암세포에서 L1CAM과 Axl의 발현이 증가하였음을 western blot, flow cytometry로 확인하였고, 세포의 이동과 침윤에 관여하고 있음을 L1CAM shRNA를 이용한 gene knockdown과 Axl inhibitor인 R428을 통해 확인하였다. 따라서, L1CAM과 Axl이 담도암 전이를 억제하기 위한 치료제 개발에 좋은 타겟으로 사용될 수 있을 것이라 판단된다. One of the biggest issues in cancer treatment is the relapse and metastasis of resistant cancer that develop after surgical removal or chemotherapy. Although many studies have been conducted on chemotherapy resistance, this issue is not easily resolved due to the heterogeneity and diversity of cancer. EMT is generally one of the key characteristics of the cancer metastasis model, where non-metastatic cell becomes metastatic through EMT. Although in the cholangiocarcinoma studies are conducted on chemotherapy resistance, the number is far marginal compared to other cancers. Therefore, in this study, a cisplatin resistant cholangiocarcinoma SCK-R cells were established from the parental cell line SCK. The SCK-R cells acquired an epithelial-mesenchymal transition (EMT) phenotype and increased capability of invasion and migration. L1CAM has been reported to increase expression and increase cell migration and invasion as EMT is promoted in breast cancer and ovarian cancer. Although L1CAM expression has been reported to increase in cisplatin-resistant cholangiocarcinoma cells, there has been no study of cell motility in cisplatin resistant cholangiocarcinoma. Axl has been reported to be involved in the metastasis of cancer by EMT and it has been reported that expression is increased in various cancers. However, direct studies of Axl in cholangiocarcinoma have not been reported. Therefore, the expression of L1CAM and Axl in cisplatin resistant cholangiocarcinoma cells was confirmed by western blot and flow cytometry, and it was shown that it was involved in cell migration and invasion by gene knockdown using L1CAM shRNA and R428 Respectively. Therefore, L1CAM and Axl can be used as a good target for the development of therapeutic agents for inhibiting metastasis.

국소 재발한 담도암의 관내 근접 방사선치료 연구

이선영 전북대학교 일반대학원 2013 국내박사

Purpose The optimal treatment of cholangiocarcinoma is complete surgical resection; however, recurrence has been reported to be highly common. As for recurrent cases, the focus of most treatments will be palliative, aimed at trying to control cancer growth and symptoms. Especially, recurrent lesion was shown around anastomosis site of the biliary tract; considering the accessibility of the lesion, brachytherapy can be attempted. Herein, the purpose of this study is to determine if the treatment modalities of brachytherapy is adequate. Therefore, this study compared the overall survival and therapeutic efficacy among the conventional treatment alone, chemotherapy and brachytherapy, in the locally recurrent cholangiocarcinoma. Methods and Materials This study was accomplished with 30 patients who showed locally recurrent cholangiocarcinoma and all patients underwent conventional treatment, such as percutaneous trans-hepatic biliary drainage and stent insertion: conventional treatment alone (Group A), 11 patients; chemotherapy (Group B), 8 patients; and brachytherapy (Group C), 11 patients. The mean time to recurrence after surgery was 25.8 months (range 5 ~ 47 months). The median ages were 62.4, 59.2 and 61.3 years, respectively (range 42 ~ 79), and there were 17 males and 13 females. 5-FU and oral-Xeloda were used as chemotherapy agents. The administered total treatment doses were 30 Gy in 5 patients, 33 Gy in 4 patients, and 39 Gy in 2 patients. Results The median survival of locally recurrent cholangiocarcinoma patients, who used conventional treatment alone, chemotherapy and brachytherapy, were 5.3, 7.2, and 11.3 months, respectively (p=0.0095). The median maintained patency period of stent after conventional treatment alone, chemotherapy and brachytherapy were 4.8, 5.6, and 10.2 months, respectively (p=0.0001). The average number of re-percutaneous interventional procedure after conventional treatment alone, chemotherapy and brachytherapy were 4.8, 5.1, and 2.7, respectively (p=0.0003). The complication rates of biliary re-interventions after conventional treatment alone, chemotherapy and brachytherapy were 62.4 %, 57 %, and 32.4 %, respectively (p=0.0173). The average time to recovery from the symptoms of jaundice, after conventional treatment alone, chemotherapy and brachytherapy were 20, 20.6, and 17.5 days, respectively (p=0.5669). Conclusion This results indicate that the brachytherapy for recurrent cholangiocarcinoma can be feasible and offer reasonable treatment methods with the expectation of enhancing the quality of life and prolonged survival duration without severe complications. In addition to this study, a prospective study with concurrent chemo-radiotherapy will be needed. Since the recurrence occurred mainly around the anastomosis site after surgery, the prophylactic radiation therapy after surgical resection for cholangiocarcinoma must be considered, also.

담관암 세포주에서 HDAC 억제제에 의한 EMT 억제 : Suppression of Epithelial-Mesenchymal Transition in Human Cholangiocarcinoma Cell Lines by the HDAC Inhibitors

왕준호 충북대학교 2013 국내박사

목적: Histone deacetylase(HDAC) 억제제인 trichostatine A (TSA) 또는 valproic acid (VPA), 단독 또는 paclitaxel 또는 gemcitabine과 병합하여 투여했을 때 인체 담관암 세포주에서 Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT)을 억제하는 지 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 3개의 인체 담관암세포주 (SNU-1079, SNU-1196, 및 J-CK)를 배양하여 TSA, VPA 및 gemcitabin과 paclitaxel를 다양한 농도로 단독 또는 병합하여 투여하였다. MTT assay를 이용하여 각 세포의 세포 성장률을 조사하였고 세포사멸은 Anexine V-FITC 와 PI 염색하여 flow cytometry을 이용하여 분석하였다. EMT와 관련하여 상피세포 표지자인 E-cadherin과 ZO-1을 선택하였고, 간엽세포 표지자로서 vimentin을 선택하여 면역형광염색법과 western blotting을 이용하여 분석하였다. 결과: 담관세포들의 성장률은 TSA 또는 VPA의 용량에 의존하여 억제되었다. J-CK 세포주에서 VPA와 gemcitabine을 병합하여 투여하였을 때 성장억제효과가 증가하였고, SNU-1079 세포주에서는 VPA 와 Paclitaxel을 병합하여 투여하였을 때 성장 억제효과가 증가하였다. 세포성장률과 세포사멸에 거의 영향이 없는 낮은 용량의 TSA 또는 VPA를 투여하였을 때, SNU-1079 세포주에서 EMT가 억제되었고, J-CK 세포주에서는 VPA를 투여하였을 때 EMT 억제되었으며, SNU-1196 세포주에서는 EMT 억제 효과를 관찰할 수 없었다. SNU-1079 세포주에서 TSA 또는 VPA를 단독으로 투여하였을 때 EMT의 억제 효과에 비해 paclitaxel 또는 gemcitabine을 병합하여 투여하였을 때 EMT의 억제 효과가 증가하였다. 결론: TSA 또는 VPA를 단독 또는 paclitaxel 또는 gemcitabine을 병합하여 투여 했을 때 일부 인체 담관세포주에서만 EMT를 억제 효과를 보였다. 그러므로 담관암 아형에 따라서 TSA 또는 VPA는 기존의 항암제와 병합하여 투여하였을 때 항암제로서 효과를 기대할 수 있을 것으로 생각한다. Aims: This study aimed to investigate the suppression of the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) of cholangiocarcinoma cell lines by the histone deacetylase (HDAC) inhibitors, trichostatin A (TSA) and valproic acid (VPA), whether alone, or in combination with paclitaxel or gemcitabine. Methods: Three human bile duct adenocarcinoma cell lines (SNU 1079, SNU 1196 and J-CK) were studied. The cytotoxic effects of TSA and VPA, as potent HDAC inhibitors, were measured using the MTT assay. Annexin V-FITC and PI staining were performed to detect apoptosis using flow cytometry. EMT related proteins were analyzed by immunofluorescence and Western blotting, using antibodies against E-cadherin and Zo-1 as epithelial cell markers, and vimentin as a mesenchymal cell marker. Results: The proliferation of cholangiocarcinoma cells was inhibited by both TSA and VPA, dose dependently. Additional effects of antiproliferation by a combination of chemotherapeutic agents and HDAC inhibitors were demonstrated in specific cells: VPA with gemcitabine in J-CK, and VPA with paclitaxel in SNU-1079. At low doses that had little or no effect on cell viability and apoptosis, the TSA or VPA treatment suppressed the EMT in SNU 1079, and the VPA treatment suppressed the EMT in J-CK, but no effect was seen in SNU 1196. Suppression of the EMT in SNU 1079 was increased when either the TSA or VPA treatment was combined with paclitaxel or gemcitabine. Conclusion: TSA or VPA, alone, or in combination with paclitaxel or gemcitabine, suppress the EMT in specific human cholangiocarcinoma cells. Therefore, TSA or VPA can be considered as anticancer drugs when combined with cytotoxic agents in a subtype of cholangiocarcinomas.