Modern Urban Economic Development of Tokyo : Empirical Evidence of Fundamental Factors Based on Fishery Infrastructure

전상준 Tokyo University of Fisheries 2005 해외박사

This paper empirically surveys the modern fishery infrastructure of Tokyo by using fishery freight and its concerned freight to prove the economic development of Tokyo, which is fundamentally based on the theory of Kindleberger and Rosenstein-Rodan. In particular, it is needed to understand that Tokyo was the 'Hub-and-Spoke' (HS) metropolis and now it is also the main HS. With the support of geographical concentration concept, the big push theory addressed by Rosentein-Rodan can be proved with the aspect of fishery infrastructure whose theory is about "Indivisibility of Production Function and Demand", and "the supply of savings". The big push theory in this paper can be explained with the result of the VAR test of fishery infrastructure, which shows that the river infrastructure gives impact to the land infrastructure in the long-term. In particular in the regression test result, the freight of processed products has positive influence on the fishery freight, which means that those facts satisfy the fundamental theory of big push such as the indivisibility in the production function and the indivisibility of demand. この硏究は, 近代東京の水産インフラと關連のインフラとの經濟發展を證明するために, 基本的に Kindleberger とRosenstein-Rodan の理論に基づいて實證硏究している. 特に, 東京は「Hub-and-Spoke(HS)」としてのメトロポリスであったが, 現在も主な日本のHS である. このような地理的な集中ということから, Rosentein-Rodan のビッグプッシュは需要の不可分·供給關數の不可分·そして貯蓄の供給という觀點から水産インフラ面を證明できるのである. この硏究の中のビッグプッシュ理論は水産インフラのVAR テストの結果によって說明できる. つまり, 川のインフラが陸地のインフラに長期間影響を與えていることである. 特に, 回歸分析の結果、加工品の貨物が水産貨物に對して正の關係にあることが明らかであった. 結局, ビッグプッシュ理論の不可分の供給と需要に關する基本的な理論を滿たしていることが明らかになった.

Identification and expression of leukocytes cell surface marker genes from Japanese flounder : paralichthys olivaceus

박찬일 Tokyo University of Fisheries 2003 해외박사

「ヒラメ白血球表面分子の構造および機能解析」 免疫·生體防御において白血球が重要な役割を果たしいることは廣く知られており, 特に, 細胞間コミュニケ-ンョンヤ細胞內へのシグナル傳達に關與している細胞表面分子は, 免疫系の多樣性からも重要である. しかし, 魚類において免疫系で動いている分子とその遺傳子についてはほとんど解明されていない. そこで, 本硏究では, 魚類の免疫·生體防脚機構に關與する白血球表面分予の構造を明らかにすることを目的とし, CD3γ/δ, CD3ε, CDl20α, CD120β およびCD40について解析を行つた. Cluster of Differentiation (CD) とは, 幹細胞に特異的な抗體を用いて同定された細胞膜上の抗原のことで, それぞれ異なる抗原をCDに番號をつけて分類したものである. CD3はT細胞膜上でCD3-TCR複合體を形成しており, TCRによって認識されたMHCからの抗原認識シグナルを細胞內に傳達する役割を擔っている. さらに, CD3はTCR遺傳子が發現するのに欠かせない分子である. ほ乳類のCD3はCD3γ鎖, CDδ鎖, CD3ε鎖およびCD3ζ鎖に分類されており, CD3γ鎖, CDδ鎖およびCD3ε鎖 は-つの祖先遺傳子から分化してきたと考えられている. CD3γ鎖, CD3δ鎖ならびにCD3ε鎖は免疫グロブリンス-パ-フアミリ-に屬しており, 細胞內領域にimmunorecepter tyrosine-based activation motif(ITAM), 細胞外領域にCXXCXE (N) motifおよびジスルフィド結合に關與するシステイン殘基の位置が保存されている. また, ニワトリおよびカエルでは, 旣知のほ乳類のCD3γ鎖とCDδ鎖の兩方に類似した構造 および機能を特ちCD3γ鎖とCD3鎖の祖先の型であるCD3γ/δ鎖の存在が報告されている. また, ニワトリではCD3ε鎖も報告されている. 一方, TNFレセプタ- ファミリ-は, 腫瘍壞死誘發因子として發見され, これらレセプタ-にリガンドガ結合することにより, 免疫擔當細胞に對して細胞活性化作用, 增殖促進 作用, アポト-シス誘導作用があり, 生體防御に深く關與していることがほ乳動物において明らかにされている. 構造はタイプI膜貫通型レセプタ-であり, システイン殘基に富む細胞外領域を有し, この領城の繰り返し構造(Cysteine rich domain)がこのレセプタ-ファミリ-の特徵である. 本硏究でヒラメよりCD3γ/δおよびCD3εをコ-ドするcDNAが得られた. CD3γ/δのcDNA全長は927bpからなり, 182アミノ酸をコ-ドしていた. また, CD3εのcDNA全長は1037bpで, 164アミノ酸をコ-ドしていた. ヒラメCD3の推定アミノ酸配列を旣知の生物の CD3の δ, ε および γ 鎖と比較したところ, いずれも相同性は25%前後であった. ヒラメCD3にはCD3の特徵である, CXXCXE(N) motif が細胞外領域に存在しており, ITAM配列が細胞內領域に存在して, ほ乳類のものと類似の構造を示した. さらに, ニつのヒラメCD3の細胞外領城には4つのシステイン殘基が保存されていた. 分子系統樹解析により, ヒラメCD3γ/δは, CD3δとCD3γに分化する前の祖先型であるCD3γ/δに分類された. ヒラメCD3εは, ほ乳類のCD3εのクラスタ-に分類された. Southern hybridizationの結果, 2種類のCD3遺傳子は, ジングルコピ-でゲノム上に存在していることが分かつだ. 兩遺傳子とも, 白血球を含む組織で高い發現が認められ, 白血球の34,9%で發現していた. ヒラメ細胞表面分子CD4O, TNFR-1およびTNFR-2のcDNAの長さはそれぞれ1,940 bp, 2,730bpおよび2,O50bpで, 300, 395および483アミノ酸殘基をコ-ドしていた. TNFR-1では細胞外領域が3つのCRDより構成され, 4つのCRDで構成されているほ乳類とは異なる構造であったが, 細胞內領域にデスドメインが存在することとほ乳類との相同性がらTNFR-1に同定した. 一方, CD40およびTNFR-2は, ほ乳類と同樣に4つのCRDで構成されていた. マイトジェンで刺激培養した白血球においてTNFR-1遺傳子の發現はLPS刺激1時間後に上昇し, 急性期炎症反應のメデイエ-タ-としての役割を果たしていることが推定された. 一方, TNFR-2遺傳子ではCon A/PMA刺激3時間後に發現量が增加し, TNFR-1とは異なるマイトジェン應答性が見られた. また, CD40においてもマイトジェンによる 發現の誘導が認められた.

STUDIES ON DRUG RESISTANT GENES IN Photobacterium damselae subspecies piscicida

김미정 Tokyo University of Fisheries 2005 해외박사

Photobacterium damselae subsp. piscicida 은 유결절증을 일으키는 원인균이다. 이 병을 치료기위해서 일본에서 많은 항생제들이 널리 사용되고 있다. 그러나 이러한 약제들의 과다한 사용은 내성균주들의 증가를 초래한다. 이 연구의 주요한 목적은 P. damselae subsp. piscicida의 분자적 수준에서 획득내성의 메커니즘을 이해하는 것이다. quinolone 내성과 감수성 균주로부터 gyrA와 parC genes을 cloning하였다. P. damselae subsp. piscicida의 내성균주는 오직 gyrA의 QRDR에서 83번째 아미노산 Ser을 Ile로 치환하는 point mutation을 일으켰고, ParC에서는 발견되지않았다. 게다가 gyrA gene에서의 point mutation은 유도된 point mutation들과 자연적으로 발생하는 polymorphisms 확인을 위해 일반적으로 이용되는 Targeting?Induced Local Lesions IN Genomes (TILLING) 법을 이용하여 확인하였다. 각각 일본과 미국에서 분리된 전달성 R plasmid인 pP99-018와 pP91278의 전염기배열을 결정하고 분석하였다. pP99-018는 총 150,057 bp이며, 185개의 예상되는 open reading frames (ORFs)를 포함한다. 유전자 분석을 기초로, 기능을 가지는 ORFs는 다음과 같이 4개의 접합전달-TRA I to TRA IV, 복제, 분배, 그리고 약제내성으로 분류된다. 반면 pP91278는 총 131,520 bp이며, 161개의 예상되는 ORFs를 포함한다. 이러한 plasmid들의 총제적인 구조는 약제내성영역과 TRA IV 영역을 제외하고는 일치한다. 약제내성영역에서는 약제내성 단백질을 수반하는 많은 전이인자가 존재한다. pP99-018에서의 약제내성 영역은 kanamycin 내성 (KMr), tetracycline 내성 (TCr), chloroamphenicol 내성 (CPr) 그리고 sulfonamide 내성 (SAr) 단백질이 각각 aphA7, tetA, catI 그리고 sul II 유전자에 일치한다. pP91278에서의 약제내성 영역에서는 TCr, trimethoprim 내성 그리고 SAr 단백질이 각각 tetA, dhfr3 그리고 sul II 유전자에 일치한다. pP99-018과 pP91278과는 다르게 pP9014에서의 약제내성 영역에서는 beta-lactamase class A로 분류되는 ampicillin 내성 유전자와 cat II로 분류되는 CPr 유전자가 확인되었다. Photobacterium damselae subsp. piscicida is the causative agent of pasteurellosis. For the control of this disease, various antimicrobial agents have been used widely in Japan. However, the extensive use of these agents has brought an increase of drug resistant strains. The main purpose of this study is to understand the mechanisms of acquired resistance in P. damselae subsp. piscicida at the molecular level. The gyrA and parC genes were cloned from quinolone resistant and sensitive strains. Resistant strains of P. damselae subsp. piscicida carried a point mutation only in the gyrA QRDR leading to a Ser-to-Ile substitution at residue position 83. No amino acid alterations were discovered in the ParC sequence. Furthermore, point mutation in gyrA gene was detected using Targeting-Induced Local Lesions IN Genomes (TILLING), which is a general strategy used for the detection of a variety of induced point mutations and naturally occurring polymorphisms. The complete nucleotide sequences of transferable R plasmid, pP99-018 from Japan and pP91278 from USA have been determined and analyzed. pP99-018 was 150,057 bp in length and contains 185 putative open reading frames (ORFs). Based on gene analysis, functions associated with ORFs may be classified into the following categories: 4 conjugative transfer-TRA I to TRA IV, replication, partition and drug resistant regions. Whereas, pP91278 was 131,520 bp in length and contains 161 putative ORFs. The overall structures of these plasmids were identical except drug resistance and TRA IV regions. In the drug resistant region, there are a number of transposable elements carrying drug resistant proteins. In pP99-018, kanamycin resistance (KMr), tetracycline resistance (TCr), chloroamphenicol resistance (CPr) and sulfonamide resistance (SAr) protein correspond to aphA7, tetA, catI and sul II genes, respectively. In pP91278, TCr, trimethoprim resistance and SAr protein correspond to tetA, dhfr3 and sul II genes, respectively. Whereas, the ampicillin resistance gene classified into beta-lactamase class A and CPr gene classified into cat II were detected in pP9014 different from pP99-018 and pP91278.

Granule-Mediated Cytotoxic Molecules from Japanese Flounder, Paralichthys olivaceus : ヒラメ顆粒球の細胞傷害性因子について

황지연 Tokyo University of Fisheries 2004 해외박사

Granule-induced apoptosis is the main immune pathway used by cytotoxic T lymphocytes (CTL) and natural killer (NK) cells against viral infection and cellular transformation. This granule dependent pathway involves the pore-forming protein perforin, and a family of serine protease known as granzymes, which induce apoptosis after a target cell is recognized by receptor-mediated conjugation. Perform acts by forming transmembrane pores which cause target cell death by osmotic lysis and granzymes enter through these perforin pores and granzyme receptors to induce apoptosis. In mammals, the granule pathway has been well described but in teleost, there is still a need to identify cytotoxic molecules. Some studies have strongly suggested that cytotoxic T lymphocytes (CTLs) and nonspecific cytotoxic cells (NCCs) are present in fish and that they are functionally similar to those of higher vertebrates, like the antiviral defence system through perforin/granzymes pathway. Here, we describe the identification and function of granule-mediated cytotoxicity molecules, perforin, granzyme and granulocyte serine protease from Japanese flounder. The cDNA and genomic DNA of perforin from Japanese flounder, Paralichthys olivaceus, were cloned and characterized. The full-length cDNA is 2157bp, coding for 587 amino acids. The amino acid sequence of the Japanese flounder perforin and previously reported mouse and human perforin were approximately 37% identical. The Japanese flounder perform gene is approximately 3kb long and consists of five exons and four introns. Southern blot hybridization of Japanese flounder DNA indicated that the perform gene exists as a single copy. We also examined the gene expression of perform in different tissues by RT-PCR. Perform is at least found in the same place as CD8+- cells using multi-labeled in situ hybridization. In addition, a Japanese flounder perform recombinant protein was produced using a baculovirus system in an insect cell line. The recombinant perform activity is calcium, temperature and pH dependent against rabbit erythrocytes. Five cDNA clones of 3 different types encoding granzyme were isolated from screening a Japanese flounder cDNA library using degenerate primers. Type 1-1 consists of 1,160bp and typel -2 consists of 2,214bp, both encoding 260 amino acid residues. Type II consists of 937bp, which encodes 261 amino acid residues. Type III-1 consists of 1,262bp, type 111-2 consists of 1,356bp, both encoding 261 amino acid residues. All of these granzymes contained the three amino acid residues histidine, aspartic acid and serine, forming the active center of serine protease, at equivalent positions. The amino acid sequence of the Japanese flounder granzyme sequences had homology of 43-47% to granzyme A and 43-46% to granzyme K. Phylogenetic tree analysis based on amino acid sequences of Japanese flounder granzymes and other granzyme families showed that the Japanese flounder granzymes clustered with other granzyme Ks. Its expression is found in hematopoietic tissue and in tissue of organs exposed to the external environment. Expression of granzyme in PBLs was up-regulated after infection with hirame rhabdovirus (HIRRV). This cytotoxic response to virus is very similar to those of perforin. The recombinant granzyme together with perform induced cytolysis and morphological changes on the HINAE cell line. Using degenerate primers, we cloned granulocyte serine protease from Japanese flounder. Typel -1 consists of 1,096bp and typel -2 consists of 1,572bp, both encoding 244 amino acid residues. The key amino acid residues of serine protease, histidine, aspartic acid, and serine, as well as their neighboring residues are well conserved. Japanese flounder serine protease has homology of 44-50% to Japanese flounder granzyme, 43% to sheep mast cell protease, 44% to cow duodenase, and 39% to human adepsin. Phylogenetic tree analysis based on the amino acid of Japanese flounder granules serine protease and other species serine protease family, showed that the Japanese flounder serine protease clustered with meloblastin, elastase, and azurocidin, all of which are neutrophil granules. The serine protease gene is expressed predominantly in hematopoietic tissues of healthy Japanese flounder. Japanese flounder serine protease was up-regulated 1 day post-infection of PBLs with HRRV. Based on these results, we have named the Japanese flounder serine protease as a granulocyte serine protease. These studies on the cytotoxic molecules of CTLs and NCCs of Japanese flounder have increased our basic understanding of cell cytotoxicity in a non-mammalian species.

STUDIES ON RHEOLOGICAL PROPERTIES OF ADDED STARCH IN FISH-MEAT GELL

공창숙 TOKYO UNIVERSITY OF FISHERIES 2000 해외박사

Studies on genetic markers for sea-farming techniques : 遺傳標識たよる水産種苗の判別た關する基礎的硏究

강정하 Tokyo University of Fisheries 1995 해외박사

1963년 일본에서 처음으로 제기된 재배어업은 수면에서의 생산성을 높이는 기술로서 지금은 세계적으로 주목받고 있다. 그러나, 재배어업의 기본이 되 는 종묘의 방류사업에서 그 방류효과의 판별은 쉬운 일이 아니며, 또한 최근 에는 방류종묘가 대상수역에 있어서 종의 다양성에 영향을 줄 수 있다는 지적이 있다. 현재 방류종묘의 동정방법으로는 지느러미의 부분절개법, tag의 부착, 경조직염색, isozyme다형해석, mitochondrial DNA다형해석등이 이용되고 있으나, 이러한 방법들은 방류개체를 확인하는 데 각각의 문제점을 가지고 있다. 즉, 물리적인 방법은 그 처리에 의한 생물체의 생존력의 저하, 그리고 그들이 생산해 낸 자손에 대해서의 확인은 불가능하다. Isozyme다형의 해석 인 경우 근연집단과 집단과의 구별이 어렵고, mtDNA다형의 해석은 부계의 유 전정보를 얻을 수 없다는 단점이 있다. 본 연구에서는 이러한 단점을 보완해줄 수 있는 새로운 유전자 marker의 개발로 인공종묘를 판별할 수 있는 방법의 개발을 목적으로 2가지의 방향으로 그 기초연구를 시도하였다. 1. 무지개 송어의 b-globin cDNA의 구조해석 및 변이성 척추동물의 글로빈 유전자는 복수의 유전자 family를 형성하고 있기 때문에많은 spacer영역이 존재한다. Spacer부분은 변이가 일어나기 쉬운 영역으로 다형이 존재가 기대된다. 본 연구에서는 무지개송어의 b-globin cDNA의 구조해석 및 변이성을 조사하여, 글로빈 유전자가 유전자 marker로서 이용될 수 있는지에 대해 검토하였다. 무지개 송어의 2년어의 혈액에서 cDNA libery를 제작하여, 무지개 송어의 b-globin cDNA를 screening하였다. 얻어진 clone의 염기배열을 해석한 결과 무지개 송어의 b-globin cDNA의 전장은 534bp, 번역되는 아미노산 수는 147잔기로 되어 있었다. 이 무지개 송어의 b-globin cDNA에 예측될 수 있는 intron영역을 포함하는 배열을 primer로 하여 PCR해석을 한 결과, 다수의 band가 증폭되었다. 이 결과는 글로빈 유전자가 family를 형성하고, 각 유전자의 intron의 길이에 다양성이 존재하는 것이 밝혀졌다. 또한 무지개 송어의 3개의계군에서 특이적 banding pattern이 관찰되었고, RFLP해석을 한 결과 무지개 송어의 종내에 5개의 다형이 검출되었다. 각 RFLP pattern은 mendel의 유전 법칙에 의해 자손에 유전되는 것이 확인되었다. 2. 외래 유전자 도입어의 생산 본 연구에서는 2개의 report gene을 이용하여 microinjection법과 electroporation법에 의해 외래 유전자 도입어의 생산을 시도하였다. Microinjection법으로는 붕어의 수정란에 lacZ유전자를 주입, 각 발생단계 에서의 도입된 외래유전자의 발현과정을 조직학적으로 관찰하였다. 그 결과 외래 유전자는 발생단계의 원장배부터 발현하여 각 조직에 mosaic적으로 발현하였다. 또한 1년이상된 transgenic 붕어를 각 조직별로 PCR해석을 한 결과,근육과 생식소에서 도입된 유전자가 관찰되어 외래유전자가 다음세대로의 전 달될 수 있음이 시사되었다. Electroporation법은 microinjection법과는 다 르게 간단한 조작으로 대량의 개체를 처리할 수 있으나 그 외래 유전자 도입 률이 지극히 낮은 단점이 있다. 본 연구에서는 electroporation의 효율을 높이는 것을 목적으로 탈수 정자를 이용 외부에서 세포내로 외래 유전자가 유입해 들어 갈 수 있도록 정자의 침투압을 조절시켜 electroportion 을 시도하였다. 그 결과 종래보다 3배 이상의 유전자 도입율을 얻어냈고, 또한 이제까지유전자 도입이 곤란했던 해산어류 및 연체동물에서의 유전자 도입을 가능하게한 방법이라 시사된다. 이상, 어류의 글로빈 유전자에는 다수의 다형의 존재하기 때문에 방류집단 의 선택, 천연의 계군해석의 유전자 marker로서 응용될 수 있다고 결론지을 수 있다. 또한 외래 유전자 도입의 적출기술은 report유전자를 이용하면 비 교적 쉽게 그 발현이 검출되기 때문에 유전자 marker로서의 유용성이 크다고 판단된다.

A study on biodefense and immune-related genes of Japanese flounder, paralichthys olivaceus

남보혜 Tokyo University of Fisheries 2000 해외박사

「ヒラメの生體防御關連遺傳子の構造および機能解析」 魚類の免疫ㆍ生體防御において白血球が重要な役割を果たしていることは廣く知られているが, 免疫系で동いている因子とその遺傳子についてはほとんど解明されていない. そこで, 本硏究では, 魚類の免疫ㆍ生體防御機構を明らかにすることを目的とし, 免疫反應機構および免疫に最も重要な細胞であるT細胞表面タンパク質について解析を行つた. 免疫反應機構の解明については, まず最初に, 多數の免疫ㆍ生體防御關連遺傳子をクロ-ン化し, 魚類の白血球においてウイルス感染あるいはマイトジエンの刺激により, 發現が誘導される遺傳子を同定し, 解析した. 次いで, 魚類のB細胞に比較して魚類のT細胞に對する抗體は末開發であり, 細胞レべルでの同定ができていないのが現狀である. そこで, 抗T細胞抗體の開發において重要と思われるT細胞表面タンパク質, 主にT細胞レセプタ-(TCR)遺傳子について解析を行つた. 免疫ㆍ生體防御關連遺傳子の解析には, ヒラメラブドウイルス(HRV) (105.8xTCID50/fish) を接種後, 24, 48, 72および96時間後に採し, 白血球をパ-コ-ル溶液 (1.072g/㎎) を用いて分離した. 分離した白血球よりmRNAを抽出し, 4サンプルを-ルした後, cDNAライブラリ-(HRV感染ヒラメ白血球cDNAライブラリ-)を作製した. また, T細胞のマイトジエンであるConcarnavalin A(Con A)およびphorbol myristate acetate(PMA)で刺激した末梢血より分離した白血球を10%FCS 含有RPMI1640にCon A(70㎍/㎖)およびPMA(0.35㎍/㎖)を加えた培地の中で, 1, 2および3時間培養したものをそれぞれ回收し, mRNAの抽出を行つた. 各白血球のサンプルをプ-ルしてcDNAライブラリ-(ConA/PMA處理ヒラメ白血球cDNAライブラリ-)を作製つた. これらのcDNAライブラリ-よりクロ-ンを無作爲に選擇し, 部分的DNAの鹽基配列を決定した. 決定した鹽基配列および推定アミノ酸配列はGenBankに登錄されている配列と比較同定し, EST解析を行つた. HRVを感染したラメ白血球cDNAライブラリ-より, 總數896クロ-ンの鹽基配列を決定した. 解析した全クロ-ンの內, 350クロ-ン(39%)は旣に登錄してある遺傳子と相同性を示したが, 殘り546クロ-ン(61%)は未知の遺傳子であつた. また, Con A/PMAを處理したヒラメ白血球cDNAライブラリ-からは550クロ-ンを選擇し, 鹽基配列を決定した結果, 262クロ-ン(47%)が旣知の遺傳子と相同性を示した. 2種類のcDNAライブラリ-において, 旣知の遺傳子と相同性を示したクロ-ンがコ-ドしているタンパク質の機能により7つのカテゴリ-(細胞分化, 細胞シグナル傳達, 細胞および組織の生體防御, 遺傳子およびタンパク質の發現, 細胞構造および運動性, 代謝, その他)に分類された. HRVを感染したラメ白血球cDNAライブラリ-は, 68%の旣知の遺傳子が免疫應答に關われると思わるカテゴリ-(細胞分化, 細胞シグナル傳達, 細胞および組織の生體防御, 遺傳子およびタンパク質の發現) に含まれた. さらに, 二つのライブラリ-より得られた遺傳子を比較して見ると, HRVを感染したラメ白血球cDNAライブラリ-からは白血球の表面に存在する樣樣なレセプタ-およびCD(cluster of differentiaion)などの膜タンパク質をコ-ドする遺傳子が多く, Con A/PMAで處理したヒラメ白血球cDNAライブラリ-からは, サイトカインおよび轉寫因子などのシグナル傳達および遺傳子發現に係わる遺傳子が主に同定されたことから, 誘導方法の偉いにより發現する遺傳子が異なることが明らかとなつた. T細胞表面のみ特異的に發現する細胞表面タンパク質の遺傳子解釋は, 主にT細胞レセプタ-(TCR)遺傳子を中心につた. 哺乳類のT細胞はTCRによつて, αβ型とγδ型に分類されている. ヒラメのTCRα鎖およびβ鎖はディジエネレイトPCR法を用いて, δ鎖はEST解析よりクロ-ンした. TCRの遺傳子再構成の特徵を調ベるため, α鎖は50クロ-ン, β鎖より37クロ-ン, δ鎖より46個のcDNAロ-ンの鹽基配列を決定した. その結果, ヒラメのTCRα, β, およびδ鎖も旣知のTCRと同樣の遺傳子構造および遺傳子再構成能力を持つことかった. さらに, ヒラメのゲノムBACクロ-ンを用いてゲノム解析を行った結果, 他の哺乳類と同樣にα鎖の遺傳子座の中にδ鎖の遺傳子座がコ-ドされていることが明らかとなつた. さらに, EST解析により, 細胞傷害性T細胞のみ發現するCD8遺傳子もクロ-ン化した. これらTCR α, β, δおよびCD8α鎖を指標として in situ hybridization(ISH)を行い, 今回クロ-ン化したこれらの遺傳子がT胞のサブタイプの同定に有效であるかどうかを試みた. 末梢血の白血球および腎臟の白血球に對してISHを行つた結果, 末梢血白血球では16.6%の細胞がTCRα鎖と, 15.1%の細胞がTCRβ鎖と, 25.5%の細胞がTCRδ鎖と陽性反應を示した. 一方, 腎臟から分離した白血球では25.4%および21.6%の細胞がTCRαおよびβ鎖に對し, 13.9%の細胞がTCRδ鎖に對し陽性反應を示し,末梢血白血球とは異なる分布率を示した. CD8α鎖のRNAプロ-ブは末梢血白血球では11.9%の細胞と, 腎臟の白血球では18.5%の細胞と陽性反應を示したが, CD8α鎖を發現するα/β T細胞に對してはそれぞれ75%および78%であり, ほとんど同じ比率であつた. これらの結果より, 我我がクロ-ン化したTCR α, β, δおよびCD8α鎖は異なるT細胞のサブタイプの檢出およびその分布率を調ベるプロ?ブとして有效であると考えられる. これらの遺傳子を用いて抗體製作が可能であれば, 魚類のB細胞と同樣に抗體を用いたT細胞の分類が可能になり, 今まで不明な部分が多かった魚類の免疫の仕組みがより明らになるものと考えられた.

Development of biosensors for freshness evaluation of marine invertebrates

신성재 Graduate School of Fisheries Tokyo University of F 1998 국내박사