법랑 기질 유도체가 치주 인대 세포의 증식 및 성장 인자 발현에 미치는 효과

김영희 이화여자대학교 임상치의학대학원 2008 국내석사

For regeneration of periodontal tissues, proliferation, migration, and extracellular matrix synthesis of periodontal ligament cells (PDLC) are necessary. Therefore stimulating the proliferation and migration of the PDL cells have become goals in periodontal regeneration. To accomplish these goals a lot of generation procedures such as bone graft and guided tissue regeneration have been used. But, the results of these therapies were always not predictable. Recently, attempt at tissue engineering technology using extracellular matrix such as enamel matrix derivatives (EMD) and growth factors have been used for periodontal regeneration. Various clinical reports suggested that EMD had been associated with the formation of acellular cementum and had been found to stimulate periodontal regeneration. However, the mechanism of EMD are largely unknown. The aim of this study was to investigate the effects of EMD on the proliferation and the release of growth factors of PDLCs. Human PDLCs were removed from the middle one-third of individual extracted 3rd molar in healthy young adults, and cultured in the media containing EMD in concentration of 0, 12.5, 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖ each. Cell proliferation was measured by cell proliferation kit, and ALP activity was also examined. And then, the evaluation of growth factors that were released by PDLCs was performed. Statistical analysis for comparing the effects of different concentrations of EMD were performed by analysis of variance (ANOVA) and Bonferroni's multiple comparison test (p<0.05). The results of this study were following : 1. Cell proliferation of PDLCs cultured in more than 25 ㎍/㎖ EMD was significantly higher than control group (p<0.05). 2. ALP activity of PDLCs cultured in 50 ㎍/㎖ EMD was significantly higher than control group (p<0.05). 3. VEGF and TGF-β released from PDLCs cultured in 50 ㎍/㎖ EMD were significantly higher than control group after 48 hours (p<0.05). Conclusively, EMD enhanced the proliferation of PDLCs, the ALP activity of PDLCs, and the release of growth factors such as VEGF and TGF-β from PDLCs. Therefore, EMD could be one of the effective method for periodontal regeneration. 손상된 치주조직의 재생을 위해 치주 인대 세포의 증식과 이주 및 세포외 기질의 합성이 필요하다. 이를 위해 법랑 기질 유도체(enamel matrix derivative, enamel matrix protein; EMD)가 치주조직의 재생을 촉진하기 위해 치주 수술 초기에 사용되고 있고, 임상가들이 EMD를 병용하여 좋은 임상 결과를 보고하고 있으나, 치주 인대 세포에 대한 EMD의 기전에 관한 연구는 부족한 상태이다. 이에 본 연구에서는 치주 인대 세포의 증식과 성장인자의 분비에 미치는 영향에 관하여 알아보고자 하였다. 치주 인대 세포는 치주 질환이 없는 성인의 소구치나 지치의 치근에서 채득 후 배양하였고, EMD를 상용화한 Emdogain (Biora, Malmo?, Sweden)을 0, 12.5, 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖ 농도로 각각 첨가하여 치주 인대 세포의 증식과 alkaline phosphatase (ALP) 활성도를 분석하였다. EMD가 첨가된 배지에서 배양한 치주 인대 세포에서 분비되는 성장 인자를 enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)를 이용하여 분석하였다. 통계 분석은 one-way analysis of variance(ANOVA)를 이용하여 농도에 따른 EMD의 효과를 비교하였고, 각 군간의 차이는 Bonferroni‘s multiple comparison test로 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다 (p<0.05). 1. 치주 인대 세포의 증식율은 25 ㎍/㎖ 이상의 농도로 EMD를 첨가한 군에서 대조군에 비해 유의성 있게 높게 나타났다 (p<0.05). 2. ALP 활성도는 50 ㎍/㎖ 농도의 EMD를 첨가한 군에서 대조군에 비해 유의성 있게 높게 나타났다 (p<0.05). 3. VEGF 와 TGF-β가 50 ㎍/㎖ 농도의 EMD를 첨가한 배지에서 배양한 치주 인대 세포에서 대조군에 비해 유의성 있게 높게 검출되었다 (p<0.05). 본 연구결과 EMD는 치주 인대 세포의 증식과 ALP활성을 증가시키고 치주 인대 세포로 인해 VEGF와 TGF-β와 같은 성장인자 분비를 촉진함으로써 치주 조직의 재생을 증진시키는 효과적인 방법이 될 수 있으리라 사료된다.

치주질환 심도에 따른 조직내 림프구 및 NK세포의 변화에 관한 면역조직학적 연구

최호근 경희대학교 대학원 1993 국내박사

컴퓨터 단층 촬영을 이용한 상악 전치부의 순측 골 두께 분석

신순희 이화여자대학교 임상치의학대학원 2010 국내석사

It needs plenty of alveolar bone to do esthetic implant at maxillary anteriors and it is essential to secure the appropriate thickness of facial bone especially on anterior region. In this study, the facial bone thickness of healthy adults was measured at maxillary anteriors using Computed Tomography(CT) by the teeth and by the region and it is evaluated the differences between parts, genders, and ages. Among patients aged 20 to 70 years, 31 patients who had healthy dentition in panoramic view were measured the thickness of facila bone at the Department of Dentistry at the Ewha Womens University from January 2005 to October 2009. 16 male patients and 15 female patients aged 20 to 73 years were studied and the average age was 46.41 years old. Among scanned CT views, the views of the each teeth of height of contour were chosen by using Para-Axial View. Cemento-Enalmel Junction(CEJ) perpendicular to long axis was standardized and the thickness of facial bone were measured 2, 4, and 6 mm below the CEJ at each of the 18 points per one patient. Measurement of bone thickness was gauged by using CT viewer program, π- viewer, at Department of Dentistry at the Ewha Womens University and the results are as below. 1. The mean facial bone thickness of maxillary anterior tooth was 1.11mm. 2. The mean facial bone thickness 2mm, 4mm, and 6mm below CEJ was statistically significant. The thickness 4mm below CEJ was the most significant (P<0.05). 3. There was no statistically significant difference of the average of facial bone thickness between maxillary central incisals(mean 1.14mm), lateral incisals(mean 1.08mm), and canines(mean 1.12mm) by each tooth. 4. There was statistical difference in the facial bone thickness with age especially in aged above 60 (P<0.05). 5. There was no statistical difference in the facial bone thickness by gender. It is essential to pre-diagnose the length of alveolar bone as well as width to secure long-term success and dental esthetic of implant. By using CT, measuring the facial bone thickness is a useful way to diagnose the amount of bone and the shape of bone. However, it is not spread out yet over the private dental clinic. So, if the amount of bone and the shape of bone of each patient are pre-diagnosed based on the data from the average of facial bone thickness and the wave trend of alveolar bone by parts, then it is quite effective to secure long-term success and dental esthetic of implant at maxillary anteriors. 상악 전치부에 심미적인 임플란트를 식립하기 위해서는 충분한 양의 치조골이 필요하며 특히 적정한 순측 골 두께의 확보가 필수적이다. 따라서 본 연구에서는 컴퓨터 단층촬영(Computed tomography, 이하 CT)을 이용하여 건강한 성인의 상악 전치부에서 치아별, 부위별 순측 골 두께를 측정하고 부위별, 성별, 연령별 차이를 평가하였다. 2005년 1월부터 2009년 10월까지 이화여자대학교 목동병원 치과 내 구강외과와 치주과를 방문하여 CT를 촬영한 20대~70대 성인 환자 중 상악 전치부가 건전한 사람 31명의 순측 골 두께를 측정하였다. 연구에 포함된 환자는 남성 16명, 여성 15명이었고, 연령은 20세부터 73세까지 다양하였으며 평균 연령은 46.41세였다. 촬영된 CT상 중 Para-Axial View를 활용하여 각 치아의 최대 풍융부의 상을 선택하였다. 치아의 장축에 수직이 되는 협설측 백악법랑경계(Cemento-Enamel Junction, CEJ)선을 기준으로 설정하고, CEJ 하방 2, 4, 6mm 지점에 CEJ와 평행한 선을 긋고 환자 1인당 18개의 측정지점에서 순측 골 두께를 측정하였다. 골 두께의 측정은 이대목동 병원 치과 내 CT 뷰어 프로그램인 ‘파이뷰어’ 프로그램의 길이측정 도구(calipers 기능)를 이용하였고 연구결과는 다음과 같다. 1. 상악 전치부 치아의 순측 골 두께는 평균 1.11mm였다. 2. 측정부위에 따른 순측 골 두께는 CEJ 하방 2mm, 4mm, 6mm에서 통계학적으로 유의한 차이가 나타났는데 CEJ하방 4mm에서 유의차 있게 가장 크게 나타났다(P<0.05). 3. 치아별 순측 골 두께 평균치는 상악 중절치 1.14mm, 상악 측절치 1.08mm, 상악 견치 1.12mm로 치아별로 통계학적 유의차는 없었다. 4. 연령에 따른 순측 골 두께에서도 통계학적으로 유의한 차이가 나타났는데 60세 이상에서 유의차 있게 좁게 나타났다(P<0.05). 5. 성별에 따른 순측 골 두께의 차이는 통계학적으로 유의한 차이가 없었다. 임플란트의 장기적인 성공과 심미성 확보를 위해서는 환자의 치조골의 길이 뿐 아니라 폭경에 대한 사전 진단이 필수적이다. CT를 이용한 순측 골 두께 측정은 골량과 골 형태를 진단할 수 있는 유용한 방법이다. 그러나 일반 개원가에 CT가 널리 보급되어 있지 않기 때문에 건강한 성인에서의 평균적인 순측 골 두께와 부위별 치조골의 굴곡 양상을 기초자료로 삼아 환자 개개인의 골량과 형태를 미리 예측한다면, 상악 전치부 임플란트 시술에서 장기적인 성공과 심미성 확보를 예측하는데 유용할 것이다.

백서 치아 발거후 잔존 치주인대가 발치와의 치조골 재건에 미치는 영향

조성훈 경희대학교 대학원 1996 국내석사

2급 치근이개부 병변의 합성골 이식 시 혈소판 농축 혈장의 재생에 관한 효과

김준희 단국대학교 2000 국내석사

번역치은의 수직적 높이 차가 치태조절에 미치는 영향

박종화 강릉대학교 대학원 2004 국내석사

2급 치근 이개부 치료 시 합성골 이식 및 혈소판 농축 혈장의 골재생 효과에 대한 디지털 공제술의 정량적 분석

오지수 단국대학교 2000 국내석사

성견 발치와에 매식한 2종의 Bovine Bone Powder가 치유에 미치는 영향에 관한 조직학적 연구

박태성 단국대학교 대학원 2000 국내석사

Videodensitometer를 이용한 치은연하소파수술후 치간골 골밀도의 변화

최진근 경희대학교 대학원 1995 국내석사

혈소판 풍부 혈장이 치주 인대 세포의 증식 및 성장 인자 발현에 미치는 영향

이선경 이화여자대학교 임상치의학대학원 2008 국내석사

Objectives: Periodontal ligament cells (PDLCs) play a important role in the regeneration of periodontium. One of the ways promoting healing potentials of PDLCs is via the use of platelet-rich plasma (PRP). PRPs contain high concentrations of growth factors and stimulate the repair and regeneration of tissues. In this study, the effects of PRP on the proliferation and the activation of PDLCs and on the release of growth factors from PDLCs were investigated. Material and methods: PDLCs were isolated from third molars or premolars of healthy young patients, 16-25 years old. Whole blood were obtained from four healthy volunteers, 25-39 years old. And PRPs were prepared using centrifugal separator (PLACONTM, Oscotec Inc., Seoul, Korea) and activated. The platelet concentration of PRP was measured and the amount of platelet-derived growth factor (PDGF)-AB, PDGF-BB, transforming growth factor-β1 (TGF-β1), vascular endothelial growth factor (VEGF) were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Activated PRPs were added to media and the effect of different concentrations of PRPs on the proliferation and the alkaline phosphatase (ALP) activity of PDLCs were investigated. The effect of PRPs on the attachment of PDLCs and on the release of growth factors from PDLCs according to time were evaluated using ELISA. As statistical analyses, Student's t-test, one-way analysis of variance (ANOVA), two-way ANOVA and Bonferroni's multiple comparison test were performed (p < 0.05). Results: Platelet concentration was 5.14 fold increased in PRP compared to whole blood. Growth factor levels in PRP were measured and mean 273.38ng/ml of PDGF-AB, 47.0ng/ml of PDGF-BB, 168.42ng/ml of TGF-β1 and 510.56pg/ml of VEGF were detected. PDLCs cultured in the media containing 10% or more concentrations of PRPs showed significantly increased cell proliferation and ALP activity compared to control (p < 0.05). PDLCs cultured in the media containing 10% PRP also presented higher cell attachment and increased release of TGF-β1 and VEGF compared to control (p < 0.05). Conclusion: PRPs could deliver high concentrations of growth factors to defect site directly and indirectly and increased the proliferation, the attachment and the ALP activity of PDLCs. From these results we suggested that PRP could be a useful tool to facilitate periodontal regeneration. 연구 목적: 치주 조직의 재생에 있어서 치주 인대 세포가 필수적인 역할을 하며 치주 인대 세포에 의한 치유를 촉진시키는 방법 중의 하나로 혈소판 풍부 혈장의 사용을 들 수 있다. 혈소판 풍부 혈장은 풍부한 성장 인자를 포함하고 있으며 이들 성장 인자를 통해 조직의 치유 및 재생을 돕는다. 이번 연구에서는 혈소판 풍부 혈장이 치주 인대 세포의 증식 및 활성, 그리고 성장 인자 분비에 미치는 영향을 in vitro 실험을 통해 평가하고자 하였다. 연구 재료 및 방법: 16-25세의 건강한 성인의 지치 또는 소구치로부터 치주 인대 세포를 채득하여 배양하였다. 25세-30세의 건강한 성인에서 전혈을 채취한 후 혈소판 농축용 원심분리기 (PLACONTM, Oscotec Inc., Seoul, Korea)를 이용해 혈소판 풍부 혈장을 제작하고 활성화하였다. 혈소판 풍부 혈장 내 혈소판 수치를 측정하고 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 분석을 통해 platelet-derived growth factor (PDGF)-AB, PDGF-BB, transforming growth factor-β1 (TGF-β1), vascular endothelial growth factor (VEGF)의 양을 측정하였다. 활성화된 혈소판 풍부 혈장을 배지에 첨가하여 그 농도에 따라 치주 인대 세포의 증식 및 alkaline phosphatase (ALP) 활성에 미치는 영향과 세포 부착에 대한 효과를 평가하였다. 또한 시간에 따라 혈소판 풍부 혈장이 치주 인대 세포의 성장 인자 분비에 미치는 영향을 ELISA 분석을 통해 평가하였다. 통계 분석에는 Student's t-test, one-way analysis of variance (ANOVA), two-way ANOVA와 그룹 간 비교를 위해 Bonferroni's multiple comparison test를 시행하였다 (p < 0.05). 연구 결과: 제작된 혈소판 풍부 혈장은 전혈에 비해 혈소판 농도가 5.14배 증가되었다. 혈소판 풍부 혈장 내의 성장 인자 농도를 측정한 결과 평균 273.38ng/ml의 PDGF-AB, 47.0ng/ml의 PDGF-BB, 168.42ng/ml의 TGF-β1 및 510.56pg/ml의 VEGF가 검출되었다. 혈소판 풍부 혈장을 첨가한 배지에서 배양한 치주 인대 세포에서 세포 증식 및 ALP 활성이 증가되었으며 10% 농도 이상의 배지에서 치주 인대 세포를 배양하였을 때 유의성 있는 결과를 얻었다 (p < 0.05). 10% 농도의 혈소판 풍부 혈장을 첨가한 배지에서 치주 인대 세포를 배양 시 세포 부착이 증가하였으며, 치주 인대 세포로부터 TGF-β1과 VEGF의 분비가 증가되었다 (p < 0.05). 결론: 혈소판 풍부 혈장은 직, 간접적으로 여러 성장 인자를 결손부에 전달할 수 있으며 치주 인대 세포의 증식 및 부착 그리고 ALP 활성도를 증가시켰다. 따라서 본 연구 결과 혈소판 풍부 혈장이 치주 조직 재생을 증진시키는데 있어서 효과적인 방법으로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.