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- 저자 : Sutthiwanjampa, Chanutchamon (검색결과 2 건)
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Chanutchamon Sutthiwanjampa 강릉원주대학교 일반대학원 2014 국내석사
The hydrolysates of fresh and boiled Venus clams (Gomphina melanaegis) with five different proteases for production of low molecular protein hydrolysates were optimized by response surface methodology (RSM). Alcalase hydrolysates exhibited the strongest inhibitory activity against hyaluronidase. The optimum hydrolysis conditions of fresh and boiled clams were: enzyme to substrate ratio (E/S), 2.15% (v/w); hydrolysis time, 150 min; water to substrate ratio (W/S), 83.84 mL/g (v/w) for fresh clam, and E/S, 2.02% (v/w); hydrolysis time, 4.11 h; W/S, 69.74 mL/g (v/w) for boiled clam. The fresh and boiled clam protein hydrolysates were fractionated by S-200 HR size exclusion chromatography, which resulted in one (FH1) and two (BH1 and BH2) fractions, respectively. Molecular mass of FH1, BH1 and BH2 were 26.5, 26.1 and 10.6 kDa, respectively. BH1 showed the highest hyaluronidase and elastase inhibitory activity with specific activity of 141.15 and 81.36 %•mL/mg, respectively. In addition, amino acid compositions and other biofunctional activities (antioxidant, tyrosinase inhibitory and immunomodulatory activity) of boiled Venus clam hydrolysate fraction 1 (BH1) was investigated since BH1 exhibited strong hyaluronidase and elastase inhibitory activity. BH1 was rich in Glycine, Glutamic acid, Aspartic acid, Threonine, Alanine, Serine, Proline, Valine and Leucine which account for 14.1, 12.8, 10.2, 8.7, 8.0, 8.0, 7.5, 7.2 and 5.3% of the total amino acid content, respectively. The IC50 values of BH1 on antioxidant activity were: DPPH scavenging activity, 201.11 g/mL; hydrogen peroxide radical scavenging activity, 424.61 g/mL; hydroxyl radical scavenging activity, 66.78 g/mL, and at concentration of 500 g/mL BH1 exhibited superoxide radical scavenging activity 13.56% in comparison with the positive control, L-ascorbic acid. BH1 also exhibited tyrosinase inhibitory activity with IC50 value of 458.54 g/mL in comparison with standard Kojic acid. Furthermore, BH1 (0.5-5 g/ml) was able to stimulate nitric oxide and various cytokines production in RAW264.7 cells, which indicated that BH1 has an immunomodulatory activity. Therefore, the boiled Venus clam hydrolysate may have a potential pharmaceutical and cosmaceutical ability because of their biofunctional (antioxidative, hyaluronidase inhibitory, elastase inhibitory, tyrosinase inhibitory and immunomodulatory) activities. 5종의 단백질 효소를 이용한 민들조개와 자숙민들조개의 가수분해는 반응표면분석법에 의해 최적화 하였다. Alcalase 가수분해물은 가장 강한 hyaluronidase 저해활성을 나타내었다. 민들조개의 최적가수분해 조건은 E/S비 2.15% (v/w), 가수분해시간 150 min, W/S비는 83.84 mL/g (v/w)로 나타났고, 자숙민들조개의 최적가수분해조건은 E/S비 2.02% (v/w), 가수분해시간 4.11 h, W/S비는 69.74 mL/g (v/w)로 나타났다. 민들조개와 자숙민들조개의 가수분해물은 S-200HR size exclusion chromatography에 의해 분획하였으며, 각각 하나(FH1)와 두개(BH1과 BH2)로 분획되었다. FH1, BH1그리고 BH2의 분자량은 각각26.5, 26.1그리고10.6 kDa이였다. BH1은 가장높은 hyaluronidase, elastase 저해활성을 보였으며, 활성도는 141.15, 81.36 %•mL/mg 이였다. BH1의 강한 hyaluronidase, elastase 저해활성을 통해 자숙 민들조개의 가수분해 분획물(BH1)의 아미노산 조성과 생물학적 활성(항산화, tyrosinase 저해, 면역조절 활성)을 측정하였다. BH1은Glycine, Glutamic acid, Aspartic acid, Threonine, Alanine, Serine, Proline, Valine 과 Leucine이 많았고 전체 아미노산의 각각14.1, 12.8, 10.2, 8.7, 8.0, 8.0, 7.5, 7.2 그리고 5.3%를 차지하였다. BH1 항산화활성의 IC50 값은: DPPH 소거 활성, 201.11 g/mL; hydrogen peroxide radical 소거 활성, 424.61 g/mL; hydrogen peroxide radical 소거 활성, 66.78 g/mL, superoxide radical 소거 활성은 500 g/mL의 농도에서 13.56%의 저해활성을 나타내었으며, 양성대조군은 L-ascorbic acid을 이용하여 비교하였다. BH1의 tyrosinase 저해활성의 IC50 값은 458.54 g/mL 대조군은 Kojic acid 이용하여 비교하였으며, 게다가 RAW 264.7 cell로부터 NO와 다른 cytokines의 분비를 증가시켜 면역활성이 우수할 것으로 보인다. 이러한 결과는 BH1이 항산화제, tyrosinase 저해제 및 면역 조절물질로 이용할 수 있을 것으로 사료된다. 따라서 자숙 민들조개 가수분해물의 생물학적 활성(항산화, hyaluronidase저해, elastase저해, tyrosinase저해, 면역조절)을 가지고 있어 잠재적인 제약원료와 화장품원료로서의 이용이 가능할 것으로 사료된다.
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