형질전환동물 생산기법에 의한 인체 간암모델 마우스의 작출 및 특성규명에 관한 연구 = (A) study on the development and characterization of transgenic mouse models for human hepatocellular carcinoma

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Transgenic mice were generated by microinjection into fertilized one-cell mouse embryos a plasmid DNA containing the SV40 large T antigen(Tag) gene fused with the mouse albumin promoter/enhancer sequences to establish animal models of human liver cancers.
Among eleven founder transgenic animals, four developed hepatocellular carcinoma, two showed kidney cancer and one developed skin and brain tumors. Three stable transgenic lines, #1-2, #1-6 and #1-11 were established
Members of the lines #1-6 and #1-11 reproducibly developed liver tumors by 8 to 10 weeks of age but did not exhibit any phenotypic changes in other tissues. Histrlogical changes leading to liver tumor formation occurred with predictable kinetics and could be classified into three distinct stages; (a) newborn to 3 weeks of age, characterized by hyperplastic hepatocytes with reduced amounts of cytoplasm without any nuclear alterations, (b) between 4 to 8 weeks of age, characterized by diffuse liver cell dysplasia without observable tumor nodules, and (c) 9 weeks of age and thereafter, characterized by hepatocellular carcinomas in the background of extensive liver dysplasia. Metastasis in the lung from a liver carcinoma was observed in #1-11 founder animal.
Molecular studies were carried out for primary and secondary tumor nodules from the #1-11 transgenic nice at 28 weeks of age and for tumor cell lines established from the same transgenic mouse to investigate the expression of the tumor suppressor genes p53 and Rb and the oncogene c-myc and cell cycle checkpoint genes cyclin Dl, cyclin A and cyclin B. The results indicated that SV40 Tag induced overexpression of the oncogene c-myc and cell cycle cheekpoint genes cyclin Dl, cyclin A and cyclin B. These results suggest that aberrant expression of these regulatory genes can play important roles in the hepatocellular carcinogenesis.
This transgenic mouse system disp]ays similarities with human liver cancers in a number of aspects and provides a useful model for the dissection of molecular events involved in the hepatocarcinogenesis.

목차 (Table of Contents)

• 목차
• I.서론 = 1
• II. 연구사 = 3
• 1. 간암관련 유전자와 분자생물학적 기전 = 3
• 2. 간암관련모델동물의 작출 및 특성 = 8
• III. 재료 및 방법 = 11
• 1. 실험동물 = 11
• 2. 항체 = 11
• 3. 과배란유기 및 수정란 회수 = 11
• (1) 과배란유기 = 11
• (2) 수정란회수 = 12
• 4. 형질전환 마우스의 생산 = 12
• (1)간세포 특이적으로 발현하는 SV40 Tag 유전자의 준비 =12
• (2) 유전자의 미세주입 = 13
• (3) 미세주입된 마우스에 수정란의 이식 = 14
• 1) 대리모의 준비 = 14
• 2) 대리모에 수정란의 이식 = 14
• 5. 형질전환 마우스의 판별 = 14
• (1) Genomic DNA의 추출 = 15
• (2) To短1 與訓A의 제조 = 15
• (3) Total Protein의 제조 = 16
• (4) 외래유전자의 분석 = 16
• 6. Southern blot 분석 = 17
• 7. Northern blot 분석 = 18
• 8. Western blot 분석 = 18
• 9. 조직병리학적인 분석 = 19
• 10. 인체 간암모델동물로부터 간암세포주의 확립= 19
• IV. 결과 및 고찰 = 21
• 1. 형질전환 마우스의 생산 = 21
• 2. 형질전환 마우스의 계통확립 = 23
• 3. 외래 유전자의 삽입 copy 수와 발현양상 = 25
• 4. 형질전환 마우스의 표현형질 = 29
• (1)Founder 마우스들의 표현형질 변화양상 = 29
• (2)형질전환 마우스의 주령별 간조직 변화양상 = 30
• (3)Ectopic expression = 33
• 5. 형질전환 마우스 간조직의 주령별 병리학적 소견 = 33
• 6. 간암발생과정에서 세포주기 관련 유전자들의 발현양상 = 36
• (1) 형질전환 마우스 간조직에서 세포주기 관련 유전자의 발현 = 36
• 1) SV40 Tag 유전자의 발현양상 = 36
• 2) 형질전환 마우스에서 종양억제 유전자 p53의 발현 = 41
• 3) Cyclin Dl, Rb, c-myc 유전자의 이상발현과 간암발생 = 42
• (2)간암세포주에서 세포주기 관련 유전자들의 발현 = 44
• 1) SV4O Tag 유전자의 발현양상 = 44
• 2) p53 유전자의 발현양상 = 45
• 3) Cyclin Dl 유전자의 발현양상 = 46
• 4) Cyclin A 유전자의 발현양상 = 46
• 5) 간암세포주에서 cyclin B 유전자의 발현양상 = 47
• V. 결 론 = 53
• VI. 적요 = 56
• VII. 참고문헌 = 58
• VII. ABSTRACT = 72