CD137과 TLR신호전달에 의한 T-세포 활성화 기작연구 = Activation of T-cells by combined stimulation of CD137 and TLR

국문 초록 (Abstract)

4-1BB는 TNFR superfamily member에 속하는 공동자극 분자로써 항원 자극 후, CD8 T 세포의 표면에 유도된다. 항진성 4-1BB 단일 클론 항체 투여에 의해 4-1BB를 자극하면 항암면역반응이 증진되어 종양의 크기를 감소시키는 것으로 알려져 있다. 그러나 4-1BB에 의해 종양을 완전히 치료할 수 있는 종양은 극히 한정되어 있어 4-1BB의 항암면역반응을 상승시킬 다른 요인이 필요하다. TLR은 병원체를 인지하는 분자로 TLR 신호는 여러 면역세포를 활성화시킨다.
본 연구에서는 항진성 4-1BB 단일 클론 항체 투여로 사람의 말초혈액에서 분리한 PBMC와 CD8 T-세포의 수가 상당하게 증가하는 것을 발견하였다. 4-1BB와 TLR2 ligand가 사람 PBMC cell의 proliferation을 증가시킨다는 결과를 얻었고, PBMC에서 분리한 CD8+cell 에서도 같은 양상을 확인하였다. 또한 a-hCD3와 4-1BB로 자극을 준 CD8+ human T-cell에서 TLR2 expression이 증가함을 확인하였다.
그리고 이와 동일한 현상을 mouse에서 4-1BB와 TLR2 동시 자극으로 면역세포를 활성화시켜 항암면역반응을 극대화시키고자 하였다.
Mice에 Renca tumor cell을 주사하여 4-1BB와 TLR ligand의 공동자극에 의해 mouse들의 tumor size가 상당히 감소하는 현상을 확인하였고 wild mouse에서 4-1BB와 TLR2 ligand공동자극에 의해 CD8+T-cell이 증식하는 것을 확인한 것에 반해 TLR2가 결여된 mice로부터 분리한 CD8+ T세포에서 4-1BB와 TLR2의 공동자극에 의한 synergistic한 효과가 관찰되지 않았다.
본 연구는 4-1BB와 TLR2를 동시 자극하여 난치성 종양을 면역치료할 수 있는 가능성을 나타낸다.

목차 (Table of Contents)

• 목차
• 국문요약………………………………………………………………………………………………….1
• Ⅰ. 서론 ………………………………………………………………………………………………….2
• Ⅱ. 재료 및 방법
• 1. Reagents, and Abs …………………………………………………………………. 5
• 2. PBMC cultures ……………………………………………………………………………… 5
• 3. Tumor cell line and animal experiments ………………………………………………. 5
• 4. Tumor induction and measurement …………………………………………………….. 6
• 5. CD8+ T cell purification ………………………………………………………………….. 6
• 6. T cell stimulation ………………………………………………………………………….. 7
• 7. MTT proliferation assay ………………………………………………………………… 7
• 8. [3H] thymidine proliferation ……………………………………………………………… 7
• 9. Cell cycle analysis by flow cytometry …………………………………………………. 7
• Ⅲ. 실험 결과
• 1. Anti-hCD3 mAb의 자극은 상승적으로 사람의 PBMC 세포 증식을 유도한다. …….9
• 2. Anti-CD137 mAb의 자극은 상승적으로 사람의 PBMC 세포 증식을 유도한다…..11
• 3. TLR2 ligand의 자극은 상승적으로 사람의 PBMC 세포 증식을 유도한다. ………..13
• 4. TLR2와 CD137 동시자극은 상승적으로 사람의 PBMC 세포 증식을 유도한다. …15
• 5. 4-1BB자극은 사람 CD8+T-세포에서 TLR2발현을 증가시킨다…………………… 17
• 6. 4-1BB와 HKLM에 의한 항종양 면역반응 ……………………………………………. 19
• 7. 4-1BB와 LTA에 의한 항종양 면역반응 ………………………………………………. 21
• 8. TLR2와 CD137 동시자극은 상승적으로 마우스의 CD8+T세포의 증식을 유도한다. …………………………………………………………………………………………………23
• Ⅳ. 고찰 ……………………………………………………………………………………………….. 25
• Ⅴ. 참고문헌 ………………………………………………………………………………………….. 27
• Abstract ………………………………………………………………………………………………. 33