사람 췌도 세포 분리의 표준화 및 분리 성적에 미치는 요인에 대한 분석 = Standardization of Isolation Procedure and Analysis of Variables on Successful Isolation of Islet from the Human Pancreas

국문 초록 (Abstract)

연구 배경: 사람에서 당뇨병의 근본적 치료를 위해 성공적인 췌도 이식이 이루어지기 위해서는 표준화된 분리 방법 및 분리된 췌도 세포의 품질 관리가 필수적이다. 또한 뇌사 기증자 및 분리 과정에 관여되는 여러 가지 요인에 의해 분리 성적이 좌우 되기 때문에 이들의 요인 분석 역시 성공적인 췌도 세포 분리를 위해 매우 중요하다.방법: 69예의 뇌사 기증자로부터의 췌도 세포 분리가 표준적인 분리 방법의 확립과 함께 이루어졌다. 성공적인 분리를 100,000 (IEQ) 이상으로 정의하여 기증자 나이, 성별, 체질량지수, 사망 원인, 냉허혈 시간, 췌장 상태, collagenase 주입 시 췌장의 팽창 정도, 주입 시간, 소화 작용시간 등이 요인으로 분석되었다. 결과: 분리 후의 평균 췌도 세포의 수는 순수 분리 전 216.0 × 103 ± 173.7 × 103 (IEQ), 순수 분리 후 130.6 × 103 ± 140.2 × 103 (IEQ)이었다. 평균 순도는 54 ± 31%였다. 분리된 췌도 세포에 대한 viability 는 95 ± 4%였으며 포도당 자극에 의한 자극지수는 4.67로 좋은 기능을 보였다. 공여자의 평균 연령은 31.2 ± 13.2 세였으며 평균 냉허혈 시간은 6.9 ± 6.2시간이었다. 균 동정 검사에서 유의한 균 검출은 나오지 않았다. 성공적인 췌도 세포 분리에 관여되는 인자에 대한 단변량 분석에서 췌장의 상태가 가장 중요한 요인이었으며 그 외 성별, collagenase 주입 시간과 소화 작용시간이 중요 인자였다. 다변량 분석에서는 기증자의 성별, 췌장의 상태, 소화 작용 시간이 유의한 인자였다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Background: Identifying the donor and isolation-related factors during the islet isolation would be greatly helpful to improve the result of human islet isolation for successful clinical islet transplantation.Methods: Sixty-nine pancreata from cadaveric donors were isolated with standard protocol and analyzed to identify the donor factors and isolation variables for successful isolation. Islet isolations recovered ≥ 100,000 Islet Equivalent (IEQ, n=53) were compared to islet mass less than 100,000 IEQ (n=16).Results: The mean islet recovery was 216.0 × 103 ± 173.7 × 103 (IEQ) before purification and 130.6 × 103 ± 140.2 × 103 (IEQ) after purification. Mean purity was 54 ± 31%. Mean age of donor was 31.2 ± 13.2 year and mean cold ischemic time was 6.9 ± 6.2 hour. Quality of isolated islets was acceptable in terms of bacterial culture, viability and secretory function in vitro and in vivo. In univariate analysis on successful isolation, status of pancreas was the only significant factor and sex, duration of collagenase expansion and digestion time were marginal factors. Stepwise multivariate logistic regression analysis showed donor sex, status of pancreas and digestion time were significant factors for the successful islet isolation. Conclusion: This study confirms some donor factors and variables in isolation process can influence the ability to obtain the successful isolation of human islet. Enough experiences and pertinent review of donor and isolation factors can make islet isolation successful, supporting the clinical islet transplantation without spending of cost (J Kor Soc Endocrinol 21:22~31, 2006).

참고문헌 (Reference)

1 "Vulnerability of islets in the immediate posttransplantation period:dynamic changes in structure and function" 45 : 1161-1167, 1996

2 "Variables in organ donors that affect the recovery of human islets of Langerhans" 61 : 1047-1053, 1996

3 "The effects of intensive treatment of diabetes on the development and progression of long term compli- cations in insulin dependent diabetes mellitus" 329 : 997-986, 1993

4 "The correlation between donor characteristics and the success of human islet isolation" 57 : 954-961, 1994

5 "Prevention of autoimmune islet allograft destruction by engraftment of donor T cells" 63 : 299-303, 1997

6 "Long term complications of diabetes mellitus" 308 : 1676-1684, 1993

7 "Islet transplantation in seven patients with type I diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen" 343 : 230-238, 2000

8 "Islet isolation from human pancreas stored in UW solution for 6 to 26 hours" 22 : 763-764, 1990

9 "International Islet Transplant Registry." 8 (8): June2001

10 "Influence of pancreas preservation on human islet isolation outcomes:impact of two-layer method" 78 : 96-100, 2004

11 "Influence of donor data and organ procurement on human islet isolation" 26 : 592-593, 1994

12 "Impact of two-layer pancreas preservation on islet isolation and transplantation" 74 : 1813-1816, 2002

13 "Human islet isolation in 104 consecutive cases" 57 : 1804-1809, 1994

14 "Extractable insulin of pancreas" 1 : 87-93, 1952

15 "Donor hyperglycemia as a minor risk factor and immunologic variables as major risk factors for pancreas allograft loss in a multivariate analysis of a single institution's experience" 215 : 217-222, 1992

16 "Current status of pancreas transplantation for the treatment of type I diabetes" 2 : 152-156, 1997

17 "Clinical islet transplantation--registry,report,accomplishment in the past and future research needs" 2 : 269-282, 1993

18 "Anaysis of donor factors affecting human islet isolation with current isolation protocol" 36 : 1034-1036, 2004

19 "An automated method for the isolation of human pancreatic islets" 37 : 2744-2749, 1988