소의 신장으로부터 ${\gamma}$-Glutamy ltranspeptidase의 정제 및 maleic acid의 영향 = Purification of Bovine Kidney ${\gamma}$-Glutamyl Transpeptidase and the Effects of Maleic acid on the Enzyme Activity

국문 초록 (Abstract)

막단백질인 ${\gamma}$-glutamyl transpeptidase를 소의 신장으로부터 정제하였는데 세포막으로부터 효소의 유리에 Triton X-100을 이용하였다. 먼저 분별원심분리법에 의해 microsome을 분리하고 acetone을 이용한 용매추출을 한 다음 Sephacryl S-300 column과 hydroxyapatite column을 통과시켰는데 그 결과 효소의 수율은 18.6%였고 효소의 고유활성도는 396배가 증가하였다. 이 효소의 반응 속도론적 특성을 보면 이 효소의 두 종류 활성중 가수분해반응에 대한 활성에서 기질활성화가 나타나며 이러한 현상은 maleic acid 존재하에 사라졌으며, maleic acid 존재하에서는 전이반응은 저해되나 가수분해반응은 오히려 증가하는 양상을 나타내었다. 또한 maleic acid는 ${\gamma}$-glutamyl기의 수용체인 glycylglycine의 농도변화에 대해 기질 억제현상을 나타내었고 pH의 변화에 대한 V'm/K'm의 변화 양상이 maleic acid의 존재 여하에 따라 변화함으로 나타나 maleic acid가 수용체 결합부위에 결합하므로 전이반응이 저해되는 것이 아니고 maleic acid가 효소의 잠재적인 활성부위를 기질에 노출시켜 가수분해반응이 증가한다는 가설에 대한 가능성을 보여주었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Membrane bound ${\gamma}$-glutamyl transpeptidase was purified from bovine kidney. The procedure includes microsome separation by differential centrifugation, solublization of the enzyme from membranes using Triton X-100, aceton treatment, gel filtration on Sephacryl S-300, and adsorption chromatography on hydroxyapetite. The enzyme was purified by 396-fold and the yield was 18.6%. The enzyme was activated by its own substrate in the absence of acceptor molecule but substrate activation was disappeared in the presence of maleic acid. Though transpeptidation was inhibited in the presence of maleic acid, hydrolytic activity was increased in the presence of maleic acid. Substrate inhibition was observed according to the increase of glycylglycine concentration in the presence of maleic acid. These results suggested the possibility that maleic acid got unmask a latent active site in a large subunit of the enzyme rather than the binding of it on the acceptor binding site on small subunit of the enzyme and such a possibility was testified partially.