출아효모에서 ciclopirox olamine 감수성 변이주의 분리

국문 초록 (Abstract)

Gl/S기로의 조절은 진핵생물의 세포주기에서 중요한 조절점이 되는데, 이는 성공적인 염색체의 복제가 세포 분열에 있어 정상적인 두 개의 딸세포를 만들기 때문이다. 세포 동조 약제의 효과는 포유동물세포에서 많은 연구자들에 의해 연구되어져 왔다. CPO (ciclopirox olamine)는 항진균제로서, HeLa 세포에서 Gl/S기의 경계나 그 부근에 작용하여 세포주기의 진행을 저해함으로서 Gl arrest함이 보고되어졌다. 출아효모에서 Gl/S기 조절에 관련된 변이주를 분리하기 위해, 본 실험에서는 CPO에 감수성을 보이는 변이주를 선별하였다. 효모에 EMS(ethyl methanesulfonate)를 처리하여 돌연변이 시킨 다음, 레플리카 방법에 의해 cos (ciclopirox olamine sensitive) 변이주를 분리하였다. 최종적으로, 12개의 cos 변이주를 분리하였는데, 8개의 변이주 (cos1, cos2, cos6, cos7, cos8, cos9, cos11, cos12)는 CPO에 감수성을 나타내었고, 4개의 변이주 (cos3, cos4, cos5, cos10) 변이주는 온도에 의존하여 CPO에 감수성을 나타내었다. DNA의 합성을 저해하는 HU (hyoxyurea)와 MMS (methyl methanesulfonate)에 대한 감수성을 조사하였다. MMS는 세포주기의 checkpoint에 결손을 나타내는 변이주에서 감수성을 나타낸다. 분리한 cos 변이주의 HU와 MMS의 감수성 정도에 따라 다음과 같이 두 그룹으로 나누었다. 첫 번째 그룹은 S기에 결손을 나타내는 변이주로서, cos1, cos3, cos4, cos7, cos8, cos9, cos10, cos11, cos12 변이주이다. 이는 HU와 MMS에 감수성을 나타내었다. 두 번째 그룹은 cos2, cos5, cos6 변이주로 HU와 MMS에 감수성을 나타내지 않는 변이주이다. 이는 세포주기에 비의존적이나 막의 투과성이나 대사계의 이상으로 CPO에 감수성을 나타낸 변이주로 간주된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Control of the G1- to S-phase transition is an important regulatory point in eukaryotic cell cycle, because successful replication of the chromosomes is a prerequisite for producing two normal daughter cells at division. The effects of cell synchronizing agents have studied by many scientists in mammalian cells. The effects of ciclopirox olamine (CPO), which is antifungal agent, on the cell cycle of HeLa cells have examined and revealed that CPO inhibits cell cycle traverse at or very near the G1/S phase boundary. To identify mutants related to the G1/S phase control in budding yeast Saccharornyces cerevisiue, we screened the sensitive mutants to CPO. Cells were mutagenized with ethyl methanesulfonate (EMS) and tested the CPO sensitivity to drug by replica method. Finally, we isolated the 12 mutants (cosl -cosl2) showed sensitivity to CPO. These mutants are classified two groups; the one showes only CPO sensitivity (cos1, cos2, cos6, COS7, cod8, cos9, cosll and cosl2) and the other has a temperature dependent CPO sensitivity (cos3, cos4, cos5 and cosl0). Therefore, cos mutants are related to Gl/S phase control in budding yeast. As the S-phase mutants show sensitivity to hydroxyurea (HU), which blocks DNA synthesis, HU sensitivity of these mutants were examined. And also we examined the sensitivity to methyl methanesulfonate (MMS), because sensitive to MMS show checkpoint in cell cycle. These mutants can be divided into two groups. One is cos1, cos3, cos4, COS7, cos8, cos9, cosl0, cosll and cosl2 mutants, which are sensitive to HU and MMS. The other is cos2, cos5 and cos6 mutants, which are not sensitive to HU and MMS. Thus these mutants are independent of cell cycle and may be defective in the metabolic pathway or the permeability of membrane.

목차 (Table of Contents)

• 목차
• Ⅰ. 서론 = 1
• Ⅱ. 실험재료 및 방법 = 4
• 1. 사용 균주 = 4
• 2. 사용배지 및 약제 = 4
• 3. EMS에 의한 돌연변이 유발 = 5
• 4. CPO 감수성 변이주의 분리 방법 = 5
• 5. HU에 대한 감수성 조사 = 6
• 6. MMS에 대한 감수성 조사 = 6
• Ⅲ. 결과 및 고찰 = 9
• 1. CPO(ciclopirox olamine)에 대한 감수성 변이주의 분리 = 9
• 2. cos 변이주에 대한 HU에 대한 감수성 조사 = 17
• 3. cos 변이주에 대한 MMS에 대한 감수성 조사 = 21
• Ⅳ. 결론 = 24
• 참고문헌 = 27
• ABSTRACT = 30