Clostridium thermocellum으로부터 새로운 제한효소 CthII의 분리 = A New Restriction Endonuclease, CthII, from Clostridium thermocellum ATCC 27405

국문 초록 (Abstract)

Clostridium thermocellum(ATCC 27405) 2g(wet weight)으로부터 새로운 type II 제한효소인 CthII를 분리하여, 그 효소의 생화학적 특성을 연구하였다. CthII는 DEAE-Cellulose와 Phosphocellulose chromatography를 통하여 분리하였다. 두번째 column인 Phosphocellulose column을 통해 나온 fraction들 중 이미 발견된 CthI peak보다 나중의 fraction들에서 이 효소가 발견되었다. CthII는 5'-CC${\uparrow}$ (A/T) GG-3'를 인식하며 화살표로 표시한 위치를 절단하는 효소임이 밝혀졌다. 이 효소의 반응을 위한 최적온도는 $55^{\circ}C$였으며, $Mg^{2+}$ 존재하에 pH 8과 pH 9 사이에서 최대활성을 보여주었다. 또한 이 효소는 NaCI이 없는 상태에서 정상적인 효소 활성을 보여주었고, NaCl 농도가 100 mM 이상일 때는 그 효소 활성이 감소됨을 관찰하였다. CthII는 BstNI과 ZanI과 같이 dcm-methylated DNA(5'-$C^{me}C$(A/T)GG-3')도 정상적으로 절단할 수 있는 특성도 있음이 발견되었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

A new restriction enzyme has been isolated by DEAE-cellulose and Phosphocellulose columns from a thermophilic anaerobic bacterium, Clostridium thermocellum ATCC 27405. Following CthI, the second peak of sequence specific endonuclease activity was eluted from the Phosphocelluse column. The enzyme was designated as CthII. The recognition sequence of CthII was determined to be the dcm sequence, 5'-CC${\uparrow}$ (A/T) GG-3' and the cleavage site was indicated by the arrow. CthII endonuclease requires $Mg^{2+}$ ion for its activity and is maximally active at a pH range from 8.0 to 9.0. CthII endonuclease is heat stable and has an optimum reaction temperature of $55^{\circ}C$. Like BstNI and ZanI this enzyme was able to cleave dcm-methylated DNA.