국내 RhD 음성 헌혈자에서의 DEL형의 Rh-Hr 표현형 및 유전자형 분석

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

The RhD antigen, which is a highly immunogenic following ABO antigen, can lead to severe hemolytic transfusion reactions and hemolytic disease of the fetus and newborn. It has been known in the past that DEL antigen, which contains very small amount of D antigen does not create anti-D antibodies when transfused to an RhD negative recipient. However, recent reports show that there have been some cases of anti-D antibodies production in an RhD negative patient after having been transfused with DEL type blood component.
In this study, we studied RhD negative red blood cells supplied to our hospital for analyzing the prevalence, phenotype, allele of DEL antigen. Adsorption-elution test, multiplex-polymerase chain reaction (PCR) including exon 4, exon 7, exon 10 and promoter of RHD gene, multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) and direct sequencing of exon 9 of RHD gene were performed.
In 100 Rhd negative samples with multiplex PCR and MLPA test, 78 showed RHD gene homozygote deletion, 4 showed the RHD-CE-D hybrid, and 18 showed RHD gene heterozygote deletion. In 18 cases with the RHD gene heterozygote deletion were confirmed by adsorption-elution test to be DEL type and the ‘Asian DEL type’ RHD (K409K, 1227G>A) polymorphism was detected by MLPA and direct sequencing of exon 9 of RHD gene in all of 18 cases. In addition, C antigen were expressed in all 18 DEL type in RhCE phenotype analysis (Ccee 14 (77.8%), CcEe 4 (22.2%)).
It is necessary for a newly developed transfusion exanination system, which distinguishes between purely D negative and DEL type blood through RHD gene examination for safer transfusion of RhD negative blood products.

국문 초록 (Abstract)

RhD 항원은 ABO 항원 다음으로 면역원성이 강한 항원으로, 생성된 anti-D 는 심각한 용혈성수혈반응 또는 태아신생아용혈성 질환을 일으킬 수 있다. 약 D형 중 극소량의 D항원을 가지고 있는 DEL 항원은 과거에는 RhD 음성 환자에게 수혈되어도 anti-D가 생성되지 않는다고 알려져 왔으나, 최근 RhD 음성 환자에게 DEL형의 혈액제제가 수혈된 후 anti-D 가 생성된 사례들이 보고되고 있다.
본 연구에서는 본원으로 공급되는 RhD 음성 농축적혈구제제에서 DEL형의 빈도, 표현형 및 DEL형의 대립유전자를 분석하기 위해 흡착-용출 시험과 RHD 유전자의 exon 4, exon 7, exon 10, promoter 부위에 대한 multiplex polymerase chain reaction (PCR) 검사, Multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) 및 RHD 유전자 exon 9 부위의 직접염기서열 분석을 시행하였다.
RhD 음성혈액 100검체 중multiplex PCR과 MLPA 검사 결과 78건이 RHD 유전자 동형접합체 결손을 보였고, 4건이 RHD-CE-D 하이브리드 형성, 18건이 유전자 이형접합체 결손을 보였다. 유전자 이형접합체 결손을 보인 18건은 흡착용출 시험에서 DEL 형으로 확인되었고, MLPA 검사와RHD 유전자exon 9의 직접염기서열 분석을 한 결과 18건 모두에서 ‘Asian DEL type’인RHD (K409K, 1227G>A) 변이가 확인되었다. 또한, DEL 형의 RhCcEe 표현형을 분석한 결과 18건 중 Ccee가 14건 (77.8%), CcEe가 4건 (22.2%) 으로 18건 모두 C 항원이 표현되었다.
RhD 음성혈액의 안전한 수혈을 위하여 RhD 음성혈액으로 공급되는 혈액제제의 RHD 유전자 검사를 통해 순수한 D 음성 혈액과 DEL 형을 구분하는 새로운 수혈검사 체계의 도입이 필요하다.