방사선 BY-445가 생성하는 α-amylase 저해물질의 특성 = Properties of α-amylase Inhibitor Producing Actionmycetes BY-445

국문 초록 (Abstract)

α-amylase에 대한 강력한 저해물질을 생산하는 방사균 BY-445를 토양으로부터 분리하였으며 이 균이 생산하는 배양액을 Amberlite IRA 420 column, Silica gel column chromatography 및 Sephadex G-50 column을 이용하여 조정제하였다. 이때 수율은 21.4％였으며 비활성도는 6배 증가하였다. 그리고 저해제의 α-amylase 100㎍에 대해 2배의 농도인 200㎍에서 저해활성이 거의 95％로 최고에 달하였다.
본 저해물질의 활성에 미치는 금속이온의 영향으로 Co^(+2), Hg^(+2), Pb^(+2), 및 Cu^(+2) 등에 의해 상대활성이 각각 13, 30, 37 및 72％로 각각 나타났다. 또한 본 저해물질은 열에 대한 안정성이 커서 100℃에서 120분간의 열처리를 하여도 그 활성은 거의 잔존하였으며 또한 전 pH 범위(pH2.0~12.0)에서도 아주 안정하였다.
본 저해물질의 여러가지 생화학적 반응을 검토한 결과 Anthrone, Molisch, Phenol-sulfuric acid반응에서는 양성을 띠었으며, Ninhydrin, Biuret, Benedict 등의 반응에서는 음성으로 나타났으며, 각종 carbohydrases에 대한 본 저해물질의 활성을 검토한 결과 사람 침 α-amylase와 Bacillus subtilis,porcine pancreas,Asp.niger의 glucoamylase등의 α-amylase에 대한 저해율이 각각 87％와 81,79,63％로 나타났으며, Aspergillus속의 cellulase와 Saccharomyces cerevisiae의 invertase에 대한 저해는 나타나지 않았다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

A strain of Actinomycetes BY-445 isolated from soil was able to produce a biological active substance that has a strong inhibitory activity against hydrolysis by α-amylase. Extracellular inhibitory substance (inhibitor) from the culture broth of Actinomycetes BY-445 was purified to partial homogeneity by procedures including Amberlite IRA 420 column, Silica gel column, and Sephadex G-50 column chromatography. The partial purifying procedures resulted in 6-fold purification with the overall yield of 21.4% and the velocity of the inhibitor was reached at maximum in inhibitor concentration of 200㎍ against α-amylase enzyme concentration of 100㎍.
In effect of metal salt, Co^(+2), Hg^(+2), Pb^(+2) and Cu^(+2), the relative inhibitory activity were shown about 13, 30, 37 and 72%, respectively and the inhibitor was also appeared to be relatively thermostable, and no appreciable inactivation was observed after incubation at 100℃ for 2 hour. The substance was stable in pH range from 2.0 to 12.0 at 37℃.
The biochemical reaction of the substance was positive to Anthrone, Molisch and Phenol-sulfuric acid, but negative to Ninhydrin, Biuret and Benedict. A strong inhibitory activity against hydrolysis by α-amylase of human saliva, Bacillus subtilis, and porcine pancreas and glucoamylase of Aspergillus niger was shown 87, 81, 79 and 63%, respectively. but it did not inhibit cellulase of Aspergillus sp. and invertase of Saccaromyces cerevisiae.

목차 (Table of Contents)

• ABSTRACT = 11
• Ⅰ. 서론 = 12
• Ⅱ. 재료 및 방법 = 12
• 1. 공시균의 분리 및 배양 = 12
• 2. 저해물질의 활성도 측정 = 13
• 3. 저해물질의 조정제 = 13
• Ⅲ. 결과 및 고찰 = 13
• 1. α-amylase inhibitor의 정제 = 13
• 2. α-amylase에 대한 저해제 농도의 영향 = 14
• 3. α-amylase에 대한 저해제의 열 안정성과 pH 안정성 = 15
• 4. α-amylase에 대한 저해활성에 미치는 금속염의 영향 = 15
• 5. 생화학적 반응 = 15
• 6. 기타 carbohydrolases에 대한 영향 = 16
• Ⅳ. 요약 = 16
• 참고문헌 = 17