N4SSB 단백질의 C-말단기의 7개의 아미노산이 N4SSB 단백질의 in vivo 활성에 미치는 영향

최미영,Choi, Mieyoung 한국미생물학회 1998 미생물학회지 Vol.34 No.4

Bacteriophage N4, a lytic phage specific for Esherichia coli K12 strain encodes single-stranded DNA-binding protein, N4SSB (bacteriophage N4-coded single-stranded DNA-binding protein). N4SSB protein is originally identified as a protein required for N4 DNA replication. N4SSB protein is also required for N4 late transcription, which is catalyzed by E. coli ${\sigma}^{70}$ RNA polymerase. N4 late transcription does not occur until N4SSB protein is synthesized. Recently it is reported that N4SSB protein is essential for N4 DNA recombination. Therefore N 4SSB protein is a multifunctional protein required for N4 DNA replication, late transcription, and N4 DNA recombination. In this study, a variety of mutant N4SSB proteins containing internal deletions or substitutions were constructed to define and characterize domains important for N4 DNA replication, late transcription, and N4 DNA recombination. Test for the ill vivo activity of these mutant N4SSBs for N4 DNA replication, late transcription, and N4 DNA recombination was examined. The results suggest that C-terminal 7 amino acid residues are important for the activity of N4SSB. Three lysine residues, which are contained in this region play important roles on N4SSB activity. Esherichia coli(E. coli) K12 균주를 숙주세포로 삼는 박테리오파아지인 N4는 single-stranded DNA에 결합하는 단백질인 N4SSB(bacteriophage N4-coded single-stranded DNA-binding protein) 단백질을 만든다. N4SSB 단백질은 N4 DNA replication 뿐만 아니라 late transcription과 N4 DNA recombination에도 필요한 여러 가지 기능을 가진 단백질이다. N4 late transcription은 숙주세포인 E. coli의 $E{\sigma}^{70}$ RNA polymerase에 의해서 수행이 되나 N4SSB 단백질을 반드시 필요로 하기 때문에 N4SSB 단백질이 생성될 때까지는 N4 late promoter로부터 RNA 합성이 일어나지 않는다. 본 연구에서는 N4SSB의 N4 DNA replication과 late transcription, 그리고 N4 DNA recombination에 필요한 영역(domain)을 알아내기 위해서 여러 가지 돌연변이형 N4SSB 단백질을 만들어 N4 DNA replication과 late transcription, 그리고 N4 DNA recombination의 3가지 작용에 대한 in vivo 활성을 조사 분석하였다. 그 결과 N4SSB 단백질의 C-말단기에 있는 7개의 아미노산이 N4SSB 단백질의 활성에 중요하다는 것을 알 수 있었다. 특히 C-말단기의 7개의 아미노산에는 세 개의 lysine이 포함되어 있는데 이 lysine이 N4SSB 단백질의 활성에 중요한 역할을 한다는 것이 제시되었다.

Studies of the Interaction between Humann Replicaiton Protein A and the DNA Repair Protein XPA

Kim,Dong-Kyoo,Lee,Bong-Eun,Sung,Jae-Wook,Lee,Jong-Ryul 인제대학교기초과학연구소 1998 자연과학 Vol.2 No.-

사람의 단일가닥 DNA결합 단백질 (HSSB)로도 알려져 있는 복제 단백질인 replication protein A(RPA)는 70, 34 11, kDa 의 크기를 가지는 세 개의 subunit (각각 p70, p34, p11)이 강하게 결합되어 있으며, DNA의 세가지 대사과정 즉, 복제, 수선, 제조합에 모두 관여한다. 본 연구에서는 RPA의 p34 및 p70 두 개의 subunit이 자외선에 의하여 손상된 DNA의 인식에 작용하는 단백질인 XPA (Xeroderma pigmentosum group A complementing protein A)와 상호 작용함을 알았다. XPA와 상호 작용하는 RPA p70의 도메인 (domain)을 밝히기 위해, p70의 다양한 도메인을 제거한 10종류의 변이체(deletion mutant)를 만들었다. 이 변이체를 이용하여 실험한 결과, p70의 어느 특정 도메인이 XPA와의 상호작용에 관여하지는 않는 것으로 생갹되었다. 또한 XPA와 RPA간의 상호작용이 simian virus 40 (SV40) DNA 복제에 미치는 영향을 살펴본 결과, XPA가 RPA와의 상호작용을 통해 SV40 DNA 복제를 저해함을 알 수 있었다. 이러한 결과들로 미루어볼 때, RPA는 DNA 대사에 관여하는 단백질들과의 상호작용을 통해 DNA 대사의 조절에 관여할 가능성을 가지고 있음을 알 수 있다. Human replication protein A (RPA; also known as human single-stranded DNA binding protein, HSSB) is a multisubunit complex (70, 34 and 11kDa subunits) involved in the three DNA metabolism; replication, repair, recombination. We found that both 34 and 70 kDa subunits (p34 and p70, respectively) of RPA interacts with Xeroderma pigmentosum group A complementing protein (XPA), a protein that specifically recognizes UV-damaged DNA. Our mutational analysis indicated that no particular domains of RPA p70 were essential for its interaction with XPA. We also found that XPA inhibited SV40 DNA replication in vitro through its interaction with RPA. Taken these results together, we conclude that there is a role for RPA in regulation through its ability to modulate interactions with proteins involved DNA metabolism.

Replication origin–flanking roadblocks reveal origin-licensing dynamics and altered sequence dependence

Warner, Megan D.,Azmi, Ishara F.,Kang, Sukhyun,Zhao, Yanding,Bell, Stephen P. American Society for Biochemistry and Molecular Bi 2017 The Journal of biological chemistry Vol.292 No.52

<P>In eukaryotes, DNA replication initiates from multiple origins of replication for timely genome duplication. These sites are selected by origin licensing, during which the core enzyme of the eukaryotic DNA replicative helicase, the Mcm2-7 (minichromosome maintenance) complex, is loaded at each origin. This origin licensing requires loading two Mcm2-7 helicases around origin DNA in a head-to-head orientation. Current models suggest that the origin-recognition complex (ORC) and cell-division cycle 6 (Cdc6) proteins recognize and encircle origin DNA and assemble an Mcm2-7 double-hexamer around adjacent double-stranded DNA. To test this model and assess the location of Mcm2-7 initial loading, we placed DNA-protein roadblocks at defined positions adjacent to the essential ORC-binding site within Saccharomyces cerevisiae origin DNA. Roadblocks were made either by covalent cross-linking of the HpaII methyltransferase to DNA or through binding of a transcription activator-like effector (TALE) protein. Contrary to the sites of Mcm2-7 recruitment being precisely defined, only single roadblocks that inhibited ORC-DNA binding showed helicase loading defects. We observed inhibition of helicase loading without inhibition of ORC-DNA binding only when roadblocks were placed on both sides of the origin to restrict sliding of a helicase-loading intermediate. Consistent with a sliding helicase-loading intermediate, when either one of the flanking roadblocks was eliminated, the remaining roadblock had no effect on helicase loading. Interestingly, either origin-flanking nucleosomes or roadblocks resulted in helicase loading being dependent on an additional origin sequence known to be a weaker ORC-DNA-binding site. Together, our findings support a model in which sliding helicase-loading intermediates increase the flexibility of the DNA sequence requirements for origin licensing.</P>

Saccharomyces cerevisiae에서 Dna2 helicase/endonuclease와 YHR122W 단백질의 상호작용

이현선,최도희,권성훈,김나연,이인환,김현정,배성호,Lee, Hyun-Sun,Choi, Do-Hee,Kwon, Sung-Hoon,Kim, Na-Yeon,Lee, In-Hwan,Kim, Hyun-Jung,Bae, Sung-Ho 한국미생물학회 2006 미생물학회지 Vol.42 No.1

Saccharomyces cerevisiae Dna2 helicase/endonuclease plays an essential role in removing DNA primers during Okazaki fragment processing in eukaryotic DNA replication. Genome-wide scale co-immunoprecipitation experiments predicted that Dna2 interacts with a novel protein YHR122W (1). In this study, we observed that overexpression of YHR122W gene suppressed the temperature-sensitive phenotype of $dna2\Delta405N$ mutation. To investigate direct interaction between these two proteins, a histidine-tagged recombinant YHR122W protein was expressed and purified from E. coli. Physical interaction between the purified YHR122W and Dna2 proteins was detected by enzyme-linked immunosorbent assays. Further more, the complex formation was most efficient at physiological salt concentration, 150 mM NaCl. The genetic and physical interactions between YHR122W and Dna2 shown in this study suggest that the biological functions of these two proteins may be closely related each other. Saccharomyces cerevisiae Dna2 helicase/endonuclease는 진핵세포 DNA 복제과정의 Okazaki fragment processing에서 RNA primer를 제거하는데 필수적인 역할을 한다. Genome-wide scale의 면역침전 실험결과, 기능이 알려져 있지 않은 단백질인 YHR122W가 Dna2 단백질과 상호작용한다고 예측되었다 (1). 본 연구에서는 이를 확인하기 위하여 YHR122W 유전자를 효모에서 과량발현시킨 결과, $dna2\Delta405N$ 돌연변이의 온도감수성 표현형이 억제되는 유전학적 상호작용을 관찰하였다. YHR122W 단백질이 Dna2 단백질과 직접적인 삼호작용을 하는지 확인하기 위하여 YHR122W를 대장균에서 재조합 단백질로 발현시키고 단백질을 정제하였다. Enzyme-linked immunosorbent assay를 통한 분석에서 YHR122W 단백질과 Dna2 단백질 사이의 상호작용을 확인하였다. 뿐만 아니라 YHR122W-Dna2 상호작용은 생리적 염도인 150 mM NaCl농도에서 가장 강한 결합을 보였다. 이러한 유전학적 상호작용과 물리적인 상호작용은 YHR122W가 생체내에서 Dna2의 기능과 밀접한 연관이 있을 가능성을 제시하고 있다.

DNA 복제 시스템의 기원에 대한 고찰

조경원(Kyung Won Jo),김경태(Kyong-Tai Kim) 한국창조과학회 2021 Origin Research Journal Vol.1 No.1

1953년, 왓슨과 크릭(Watson and Crick)에 의해 발견된 DNA의 이중나선 구조는 분자생물학이라는 새로운 학문이 시작되게 할 만큼 획기적인 발견으로 평가된다. 수십 년이 지난 현재 과학계는 DNA가 어떻게 복제되고, 손상을 복구하며, 후세에 유전되는지 그리고 이어지는 후속 발견을 통해 DNA에 대한 이해를 넓혀가고 있다. DNA를 연구하며 DNA가 가지고 있는 복잡한 기전들을 밝혀가는 노력을 통해 우리는 그 정교함에 놀라움을 금할 수 없다. DNA 유전체에 대한 비밀들이 풀려나가는 것은 매우 바람직한 일이지만 우리가 이해하면 할수록 ‘어떻게 이러한 복잡한 기전들이 존재할 수 있게 되었는가’에 대한 질문을 스스로에게 할 수밖에 없을 것이다. 본 논문에선 이러한 다양한 DNA 관련 기전 중 DNA 복제 과정에 대해 자세히 알아보고자 한다. 세균영역, 고균영역, 진핵생물영역 각각의 DNA 복제 기전을 비교해 봄으로써 기존에 진화론을 기반으로 설명하던 DNA 복제 기전의 기원에 대한 가설들이 정말 타당한 가설인지 검토해 보고자 한다. In 1953, discovery of double helical structure of DNA by Watson and Crick led to a breakthrough which gave birth to a novel field of molecular biology. Now with decades of research, we understand more than just how DNA is replicated, repairs itself, and inherited to the offspring. More we study about the DNA we cannot ignore but marvel at the intricate mechanism of DNA regulation. It is very welcoming that mystery of DNA is slowly being unraveled. However, because we are discovering more about the complexity of DNA regulation, we cannot help but ask ourselves: ‘How did they come?’. In this article we will be speculating about one of the DNA regulatory mechanisms: DNA replication. By comparing the DNA replication machineries in Bacteria, Archaea, and Eukarya, we will evaluate whether existing hypothesis about origin of DNA replication derived from evolutionary theory is acceptable.

B형 간염 간세포암 환자에서의 간절제 후 혈청 HBV DNA 역가의 변화

이해원(Hae Won Lee),서경석(Kyung-Suk Suh),김주현(Joohyun Kim),신우영(Woo Young Shin),이남준(Nam-Joon Yi),이건욱(Kuhn Uk Lee) 한국간담췌외과학회 2010 한국간담췌외과학회지 Vol.14 No.1

Purpose: Reactivation of hepatitis B virus (HBV) replication after hepatic resection might be a significant risk factor for prognosis in patients with chronic hepatitis B. The purpose of the present study was to investigate the changing pattern of serum HBV DNA titer after hepatic resection and to assess the incidence of reactivation of HBV replication. Methods: Among HBV-positive patients who underwent hepatic resection for hepatocellular carcinoma, thirty-six patients with preoperative serum HBV DNA titer ≥3 log10copies/mL were enrolled. Serum DNA titers were examined before the operation, on the second and seventh postoperative days, and one month after the operation. Results: The serum DNA titer decreased on the second postoperative day (p=0.078). The DNA level, however, had substantially returned to preoperative values by the seventh postoperative day (p<0.001). For most patients, the postoperative DNA titer reached its zenith on the seventh postoperative day or one month after the operation. The zenith level was higher (by 0.49±0.25 log10copies/mL) than preoperative levels although this difference just missed significance (p=0.068). Although postoperative reactivation of HBV replication emerged in 6 patients, only one of those patients developed postoperative hepatitis. Overall, four patients developed postoperative hepatitis and all of them had high postoperative HBV DNA levels (over 6 log10copies/mL). Conclusion: Although serum HBV DNA titers tended to increase postoperatively, routine antiviral therapy might be unnecessary because of the low incidence of postoperative hepatitis. High postoperative DNA levels, however, might be a risk factor for hepatitis, and postoperative follow-up of serum HBV DNA levels might be necessary in HBV-positive patients with hepatic resection.

Functional Studies on the Interaction between Human Replication Protein A and Xeroderma pigmentosum Group A Complementing Protein (XPA)

Lee, Bong-Eun,Sung, Jae-Wook,Kim, Dong-Kil,Lee, Jong-Ryul,Kim, Nam-Deuk,Kang, Shin Won,Kim, Dong-Kyoo 부산대학교 유전공학연구소 1999 분자생물학 연구보 Vol.15 No.-

The human replication protein A (RPA; also known as human single-stranded DNA binding protein, HSSB) is a multisubunit complex (70, 34 and 11 kDa subunits) involved in the three processes of DNA metabolism; replication, repair, recombination. We found that both 34 and 70 kDa subunits (p34 and p70, respectively), of RPA interacts with the Xeroderma pigmentosum group A complementing protein (XPA), a protein that specifically recognizes UV-damaged DNA. Our mutational analysis indicated that no particular domains of RPA p70 were essential for its interaction with XPA. We also examined the effect of this XPA-RPA interaction on in vitro simian virus 40 (SV40) DNA replication catalyzed by the crude extract and monopolymerase system. XPA inhibited SV40 DNA replication in vitro through its interaction with RPA. Taken together, these results suggest that there is a roli for RPA in the regulation of DNA metabolism through its ability to modulate the interactions of proteins involved in the processes of DNA metabolism.

V79 배양 세포에 있어 인삼추출물이 DNA복제 및 회복 합성에 미치는 분자생물학적 연구

卞富亨,徐富一,卞晟僖 대한본초학회 1999 大韓本草學會誌 Vol.14 No.2

본 연구는 인삼추출물이 DNA 복제 및 회복 합성에 미치는 영향을 조사하기 위해 수행되었다. DNA 복제 및 회복 합성도의 측정은 V79 chinese hamster lung cell의 핵 내 DNA에 [3H]-tymidine이 유입되는 양으로 측정하였다. 그 결과 인삼추출물의 농도(0~1ug/㎖)가 높을수록 점점 더 크게 감소하였다. 이와 같이 인삼추출물에 의하여 DNA 복제 합성도가 감소하는 현상은 농도가 더 높을수록 효과적인 것으로 보아 농도에 의존한다는 것을 알 수 있었다. 한편 DNA 회복 합성도에 인삼추출물이 미치는 영향을 알아보기 위해 우선 DNA를 손상시켰다. DNA를 손상시키는 물질은 여러 가지 있으나, 본 실험에서는 자외선과 methylmethane sulfonate(MMS)를 사용하였다. 이렇게 손상된 DNA가 인삼추출물(0~1ug/㎖)에 의하여 얼마나 회복되었는가를 알아보기 위하여 인삼추출물의 농도를 각각 달리하여 V79 cell에 첨가하였다. 그 결과 인삼추출물의 농도가 높을수록 DNA 회복합성도는 증가하였다. 이와 같이 인삼추출물이 DNA 복제 합성은 억제하고, DNA 회복 합성은 증가시키는 상반된 효과를 보여 주었다. 이러한 상반된 효과는 복제합성과 회복합성의 두 과정에서 서로 다른 효소체계가 관여하기 때문인 것으로 보인다. 인삼추출물이 DNA복제 및 회복합성에 미치는 영향에 대하여 보다 더 구체적인 분자생물학적 메커니즘 연구가 이루어져야 할 것이다.

Combined Effect of Ganciclovir and Vidarabine on the Replication, DNA Synthesis, and Gene Expression of Acyclovir-resistant Herpes Simplex Virus

양영태,정동균,모리 마사가즈,Yang, Young-Tai,Cheong, Dong-Kyun,Mori, Masakazu The Korean Society of Pharmacology 1989 대한약리학잡지 Vol.25 No.1

Ganciclovir(GCV)와 Vidarabine(ara-A)을 단독으로 또는 동시에 HSV-1에 작용시켰을때 HSV-1의 복제, DNA합성 및 단백질 합성에 미치는 영향을 관찰할 목적으로 본 연구를 시행하였다. 본 실험에서는 4가지의 다른 HSV-1(Wild type KOS, $VCV^r$, $IUdR^r$, 및 $PAA^r5$)를 사용하였다. Virus복제에 미치는 항 virus약의 효과는 Vero 세포단층 배양에서 Yield reduction assay에 의해서 관찰하였다. 항 virus약의 virus DNA 합성에 미치는 영향은 NaI 밀도 구배초원심침전후 $H^3-$표지 virus DNA의 방사능에 의해서 관찰하였다. Virus 단백질의 합성에 미치는 항 virus약의 효과는 $^{35}S$를 표지한 후 polyacrylamide 겔 전기영동법, 자가방사기록법 그러고 virus bands의 음영농도주사법을 이용, 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. GCV는 wild trype HSV-1 KOS와 $PAA^r5$의 복제를 강력하게 억제하였으나 $ACV^r$와 $IUdR^r$는 GCV에 대해서 중등도의 저항을 보였다. ara-A는 실험대상의 모든 HSV-(KOS, $ACV^r$, $IUdR^r$ 및 $PAA^r5$)의 복제에 대해서 거의 비슷하게 억제효과를 보였다. GCV와 ara-A 동시첨가는 KOS와 $PAA^r5$의 복제에 대해서 상승적인 억제효과를 보였고 $ACV^r$와 $IUdR^r5$의 복제에 대해서는 상가작용이하의 억제 효과를 보였다. 2. GCV또는 ara-A는 HSV-1감염 Vero세포에서 virus DNA의 합성을 유의하게 억제하였다. GCV와 ara-A의 동시첨가는 KOS 또는 $PAA^r5$ 감염세포에서 virus DNA 합성을 GCV 또는 ara-A를 단독 첨가하였을때 보다 현저하게 억제하였다. $ACV^r$ 또는 $IUdR^r$ 감염세포에서는 이런 현상을 관찰할 수 없었다. 3. Wild type HSV-1 감염세포에서 virus-단백질의 합성은 GCV, ara-A의 단독 첨가 또는 GCV와 ara-A의 동시첨가에 의해서 변경되지 않았다. Wild type HSV-1 감염말기에 GCV 또는 ara-A 단독 혹은 동시첨가에 의해서 virus 단백질의 합성은 경미하나마 유의성있게 증가하였다. Wild type HSV-1과 $PAA^r5$에 의한 단백질의 합성은 GCV 또는 ara-A 단독 첨가에 의해서 유의성있게 억제되었다. GCV또는 ara-A의 동시첨가는 GCV또는 ara-A를 단독으로 첨가했을 경우보다 단백질의 합성을 더욱 억제하였다. 이상의 실험결과로 보아 GCV와 ara-A의 동시사용은 HSV-1 혹은 ACV저항 DNA polymerase변이주인 $PAA^r5$에 대해서 상승적인 억제작용을 나타냈으며 이 효과는 virus DNA 합성 억제에 의한 것으로 생각된다. ACV저항 thymidine kinase 변이주인 $ACV^r$ 및 $IUdR^r$에 대해서는 ara-A가 유효하였다. 항 virus 약물에 의한 virus 단백질합성의 변화는 virus DNA 합성에 대한 억제효과에 인한 것으로 사려된다. Combined effects of ganciclovir (GCV) and vidarabine (ara-A) on the replication, DNA synthesis, and gene expression of wild type-1 herpes simplex virus (HSV-1) and three acyclovir (ACV)-resistant HSV-1 mutants were studied. These mutants include a virus expressing no thymidine kinase $(ACV^r)$, a virus expressing thymidine kinase with altered substrate specificity $(IUdR^r)$, and a mutant expressing altered DNA polymerase $(PAA^r5)$. GCV, an agent activated by herpesvirus specific thymidine kinase, showed potent antiviral activity against the wild type HSV-1(KOS) and DNA polymerase mutant $(PAA^r5)$. The ACV-resistant mutants with thymidine kinase gene $(ACV^r\;and\;IUdR^r)$ were resistant to GCV. All tested wild type HSV-1 or ACV-resistant HSV-1 mutants did not display resistance to vidarabine (are-A). Combined GCV and ara-A showed potentiating synergistic antiviral activity against wild type KOS and $PAA^r5$, and showed subadditive combnined ativiral activity against thymidine kinase mutants. Combined GCV and ara-A more significantly inhibited the viral DNA synthesis in wild type KOS and $PAA^r5-infected$ cells to a greater extent than either agent alone, but the synergism was not determined in $ACV^r$ or $IUdR^r-infected$ cells. These data clearly indicate that combined GCV and ara-A therapy might be useful for the treatment of infections caused by wild type HSV-1 or ACV-resistant HSV-1 with DNA polymerase mutation. ACV-resistant viruses with the mutation in thymidine kinase gene are also, resistant to GCV, but susecptible to ara-A, indicating that ara-A would the drug of choice for the treatment of ACV-resistant HSV-1 which does not express thymidine kinase or expresses thymidine kinase with altered substrate specificity. While the synthesis of viral ${\alpha}-proteins$ of wild type HSV-1 was not affected by ACV, GCV, ara-A, or combined GCV and ara-A, the synthesis of ${\beta}-proteins$ was slightly but significantly increased at the later stage of viral infection by the antiviral agents. The synthesis of ${\gamma}-proteins$ of wild type HSV- 1 was significantly inhibited by ACV, GCV, ara-A, and combined GCV and ara-A. Combined GCV $(5-{\mu}M)$ and ara-A $(100-{\mu}M)$ also significantly altered the expression of viral ${\beta}-and$ ${\gamma}-proteins$, of which efffct was similar to that of GCV $(10-{\mu}M)$ alone. Although ACV at the concentration of $10-{\mu}M$ did not alter the expression of ${\alpha}-$, ${\beta}-$, and ${\gamma}-proteins$ of ACV-resistant $PAA^r5$, GCV and ara-A significantly alter the epression of ${\beta}-and$ ${\gamma}-proteins$, not ${\alpha}-protein$, as same manner as they altered the expression of those proteins in cells inffcted with wild type HSV-1. Combined GCV $(5-{\mu}M)$ and ara-A $(100-{\mu}M)$ altered the expression ${\beta}-and$ ${\gamma}-proteins$ in $PAA^r5$ infected cells, and the effect of combined regimen was comparable of that of GCV $(10-{\mu}M)$. These data indicate that the alteration in the expression of ${\beta}-and$ ${\gamma}-proteins$ in wild type HSV-1 or $PAA^r5$ infected cells could be more significantly affected by combined GCV and are-A than individual GCV or ara-A. In view of the fact that (a) viral ${\alpha}-$, ${\beta}-$, and ${\gamma}-proteins$ are synthesized in a cascade manner; (b) ${\beta}-proteins$ are essential for the synthesis of viral DNA; (c) the synthesis of ${\beta}-proteins$ are inhibited by ${\gamma}-proteins$; and (d) most ${\gamma}-proteins$ are made from the newly synthesized progeny virus, it is suggeste

새로운 항암제 DA-125의 유전자 복제 억제 기작

이상광(Snag Kwang Lee),김도진(Do Jin Kim),오유택(You Take Oh),이상득(Sang Deuk Lee),우은란(Eun Rhan Woo),신차균(Cha Gyun Shin) 대한약학회 1999 약학회지 Vol.43 No.5

DA-125, a new antitumor agent, was compared with adriamycin, a known DNA intercalator, in terms of inhibitory mechanism of DNA replication by using replicating simian virus 40(SV40) genome In vivo. In analyzing the SV40 DNA replication intermediates present in cells treated with DA-125, it was not observed to accumulate B-dimers of SV40 DNA which are prominent in adriamycin-treated cells. However, treatment with DA-125 induced dose-dependent formation of DNA-topoisomerase complex which is characteristic of topoisomerase poisons. In addition, DA-125 showed more efficient in inhibiting SV40 DNA replication than adriamycin. Therefore, on the basis of this observation, we suggest that DA-125, a derivative of adriamycin, inhibits DNA replication by blocking topoisomerase activity as a topoisomerase poison although adriamycin blocks topoisomerase activity as a DNA intercalator.