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      • Production of monoclonal antibodies specific for RNA-dependent RNA polymerase of hepatitis C virus : C형 간염바이러스의 RNA-dependent RNA polymerase에 특이적인 단일클론항체 제조에 관한 연구

        박정민 The Graduate School of Hallym University 2002 국내박사

        RANK : 249723

        C 형 간염 바이러스는 만성 간염 및 간암을 유발하는 주된 병원체로서 Flaviviridae family 에 속하며 외피단백질 (envelope proteins)을 가지고 있다. 1989 년에 C 형 간염 바이러스의 genome 이 처음 cloning 되었으나 현재까지 C 형간염 바이러스에 대한 in vitro 세포배양 기술의 결여로 바이러스에 대한 병원성 및 복제 기전에 대한 연구가 지연되고 있다. C 형 간염 바이러스는 않은 genotype 으로 나뉘어지며, genome 의 염기서열이 다양하고 바이러스 외피단백질의 지속적인돌연변이로 인하여 바이러스를 중화시킬 수 있는 백신개발에 어려움이 있다. 바이러스 입장에서는 중화항체를 회피할 수 있는 cytotoxic T lymphocytes (CTL)에 의해 사멸되지 않음으로서 가장 진화된 생존전략이라 볼 수 있다. 이미 HIV에서 효소억제제 개발로 효과를 나타낸 경험이 있기 때문에 C 형 간염 바이러스의 치료제로도 효소가 가장 유력시 된다. C 형 간염 바이러스의 NS5B 단백질은 RNA genome을 복제하는 RNA-dependent RNA polymerase 활성을 가지며 genome 의carboxy-terminal의 제일 끝에 위치하는 NS5B 단백질에 의해 발현된다. 본연구에서는 NS5B 단백질에 특이적으로 작용하는 다양한 단일클론항체를 제조한 후 이를 정제하였으며 나아가서는 이런 단일클론항체들이 NS5B 단백질의 polymerase 활성에 어떠한 영향을 주는지 알아보고자 하였다. 우선 NS5B 단백질을 baculovirus expression system을 이용하여 발현시킨 후 Ni-NTA agarose column 을 이용하여 정제하였다. 8주된 BAL/c mice 에 정제한 NS5B 단백질을 Complete Freund's adjuvant와 혼합하여 주사한 후, 3-4주 간격으로 incomplete Freund's adjuvant를 사용하여 NS5B 단백질을 3-4 차례 더 boosting 하였다 이렇게 얻은 Immunized mice 로부터 spleen cell 을 분리하여 myeloma cell 과 결합시켜 hybridomas를 선별하여 세포배양후, 그 media 를 모아 sepharose-A column 을 통해 단일클론항체를 정제하였다. 이렇게 제조한 여러가지 단일클론항체가 정제한 NS5B 단백질과 서로 특이적으로 작용하는지 알아보기 위해 면역반응을 수행한 결과 단일클론항체 7S3, 5B4, 그리고 3H5 가 NS5B 단백질을 특이적으로 인지하는 것을 알 수 있었다. 따라서 이러한 단일클론항체와 작용하는 NS5B 단백질의 epitope부위를 세부적으로 연구하기 위해 NS5B단백질을 크게 세 부분 (-N, -M, 그리고 -C) 으로 나누어 각각 GST (Glutathione-5-Transferase) 와 tagging 시켜 E. coli.에서 발현시켜 정제하였다. immunoblot assay 결과 제조된 단일클론항체들이 각각 NS5B 단백질의 -N, -M 부분을 특이적으로 인지하는 것을 관찰할 수 있었다. 흥미롭게도 그 중에서 5B4 단일클론항체는 NIH 1b NS5B 단백질은 인지하지만 Korean 1b NS5B 단백질은 인지하지 않았다. 이것은 5B4 단일클론항체가 NIH1b genotype 에 특이적인 항원인지 부위를 가지는 걸 의미한다. 위와 같은 연구결과 제조한 단일클론항체가 C 형 간염바이러스의 복제기전에 중요한 기능을 하는 NS5B단백질과 특이적으로 작용하는 것을 알 수 있었다. 따라서 이런 특징을 갖는 단일클론항체를 이용하여 NS5B 단백질의 RNA-dependent RNA polymerase 기능에 어떤 영향을 주는지 알아보기 위해 RNA-dependent RNA polymerase (RdRp)assay 를 수행하였다. 그 결과 단일클론항체 7S3 와 3H5 가 NS5B 단백질의 RdRp activity 를 억제함을 관찰할 수 있었다. 그 중에서 7S3 단일클론항체가 3H5 단일클론항체보다 더 효율적으로 RdRp activity 를 감소시켰다. 따라서 이런 단일클론항체들을 이용하여 C 형 간염 바이러스의 복제메카니즘을 규명하고 이를 기반으로 항바이러스제를 개발하는데 좋은 기초 연구 자료로 사용될 수 있으리라 사료된다.

      • Milk progesterone의 定量手段으로서 單一클론抗體를 利用한 Microplate-EIA의 測定法 開發에 관한 硏究

        홍승욱 檀國大學校 大學院 1991 국내석사

        RANK : 249710

        本 硏究는 progesterone 單一클론抗體와 非發癌性 物質인 TMB를 利用하여, 小規模實驗室 에서 簡便하게 活用할 수 있는 progesterone 定量을 위한 免疫分析法(microplate-EIA)을 確立하고, 이를 利用하여 牛乳中 progesterone의 濃度를 測定하여 젖소의 姙娠早期診斷法으로서의 可能性 및 診斷의 正確度를 調査할 目的으로 實施하였다. 1. Progesterone 單一클론抗體 및 HRP-P와 TMB를 利用하여, 確立된 microplate-EIA 法으로 progesterone의 濃度를 測定한 結果 測定의 敏感度가 매우 良好하여 5pg/well 水準까지 測定이 可能하였다. 2. 0.1ng/ml 로부터 3.2ng/ml까지의 progesterone 濃度를 利用하여 標準曲線(standard curve)을 作成한 結果 回歸曲線 方程式의 決定係數(R^(2))는 0.993으로 매우 높았으며, 反復測定시 intra-assay 및 inter-assay에 대한 變異係數(C.V. %)는 각각 4.4%-10.6% 와 5.6%-12.6% 로서 測定의 精密度가 良好한 水準으로 나타났다. 3. Microplate-EIA法은 測定의 敏感度와 精密度가 높고 安定되어 姙娠早期診斷 및 각종 卵巢機能의 異狀有無 測定에 簡便하고 低廉하게 利用할 수 있는 것으로 判定되었다. A simple and sensitive microplate enzyme immunoassay (Microplate-EIA) was developed for progesterone, based on monoclonal antibody against progesterone as anti-progesterone, horseradish peroxidase (HRP ) as enzyme-label and tetramethylbenzidine (TMB) as non-carcinogenic substrate. 1. The assay has a sensitivity of 5pg-1280pg / well and intra- and inter assay coefficients of variation for progesterone standard curve (0.lng- 3.2ng / ml) were ranged 4.4% - 10.6% and 5.6% - 12.6%, respectively. 2. The assay is performed in less than three hours and provide reliable values to differentiate among milk samples from day 0 (A.I.) to day 21 in cows. 3. These results indicate that the Microplate-EIA method may be suitable for pregnancy diagnosis and other fertility controls in cows especially in a small scale laboratory. Furthermore it will be suggested that this method can be practically used as a rapid detection of estrus.

      • Human Lactoferrin의 단일클론항체를 이용한 Time-resolved Fluoroimmunoassay개발에 관한 연구

        김도희 建國大學校 大學院 1994 국내석사

        RANK : 249709

        이 연구는 human Lactoferrin의 정량을 위한 time-resolve fluoroimmunoassay(TR-FIA)를 개발하고 이를 ELISA와 비교하여 그 이용가능성을 조사하기 의해 실시되었다. 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. Human Lactoferrin으로 감작시킨 생쥐의 비장세포와 골수종세포 (Sp2/0-Agl4)를 융합하여 11.9%의 융합효율을 나타내었다(42 / 360). 강한 양성반응을 보인 5D64E6 clone을 취하여 실험에 사용하였다. 2. HRP-Rabbit Anti-Mouse IgM, IgG+A+M, IgG_(1), IgG_(2a), IgG_(2b), IgG_(3)을 사용하여 결정한 5D64E6단일클론항체의 isotype은 IgG_(2b)였다. 3. 5D64E6 hybridoma세포를 Balb/c의 복강에 접종하여 얻은 복수의 역가 (titre)는 indirect ELISA로 측정한 결과 1 : 50,000이였으며, 토끼항혈청의 역가는 1 : 400,000이였다. 4. HRP 및 Europium chelate를 항원인 human Lactoferrin과 표지하였다. Eu-hLF conjugation의 yield는 1.36으로, hLF 한 분자당 약 1.36개의 Eu이 결합했음을 알 수 있었다. 5. 토끼복합항체와 단일클론항체를 이용한 TR-FIA및 ELISA로서 표준곡선 (standard curve)을 작성하였다. 단일클론항제를 이용한 TR-FIA의 경우 측정범위 (detection range)가 5 μg - 9.8ng/ml이였으며, 감도는 9.8 ng/ml였다. 6. 5D64E6 단일클론항체를 이용한 TR-FIA의 반복성정도를 평가하기 위한 Intra-Inter assay 변이상수 (C.V.)는 각각 1.2 - 12.7%, 0.95 - 12.87% 였다. This study was carried out to develope time-resolved fluoroimmunoassay(TR-FIA) to human lactoferrin(hLF) with polyclonal antibody and Monoclonal antibody(McAb) and the newly developed method was compared with Enzyme-linked Immunosorvent assay(ELISA). The results obtained are as follows; 1. Spleen cells from Balb/C immunized with hLF were fused with myeloma cell, Sp2/0-Agl4 and resulted in 11.9% of fusion efficiency (42/360). The 5D64E6 clone haying the strongest positive response was chosen as a candidate for the assay. 2. The isotype of the produced McAb, SD64E6 was determined by using HRP-Rabbit Anti-Mouse IgM,IgG+A+M, IgG_(1), IgG_(2a), IgG_(2b), IgG_(3) and turned out to be IgG_(2b). 3. The titre value of ascitic fluid of mice Inoculated with 5D64E6 clone hybridoma determined by indirect ELISA was 1 : 50,000. That of Rabbit anti-serum was 1 : 400,000. 4. Horse-radish Peroxidase(HRP) and Europium(Eu) chelate was conjugated with Ag, hLF. The yield of the Eu-hLF conjugation (Eu μmol / protein μmol) was 1.36. 5. Standard curve of hLF were constructed in competitive TR-FIA and ELISA using Rabbit polyclonal antibody and 5D64E6 McAb. The detection range was 5 μg - 9.8 ng/ml and sencitivity was 9.8 ng/ml in TR-FIA using McAb. 6. Reproducibility (C.V.) of the TR-FIA using 5D64E6 McAb was 0.95 - 12.87% In inter-assay, 1.2 - 12.7% in intra-assay

      • B형 간염 바이러스의 표면항원에 대한 항체 발현 및 생산과 그 항체를 이용한 Time-Resolved Fluoroimmunoassay법의 개발

        김윤규 建國大學校 大學院 1997 국내박사

        RANK : 249707

        B형 간염바이러스(HBV)에 특이성을 갖는 항체들이 세포융합과 항체 engineering기법에 의해 생산되었으며, 이들을 이용하여 HBs항원과 anti-HBs 항체 측정을 위한 time-resolved fluoroimmunoassay(TR-FIA)법이 개발되었다. 1. HBV prS1 항원에 대한 단일클론항체를 생산하기위해 maltose-binding protein (MBP)-preS1(56)과 glutathione S-transferase(GST)-preS가 E. coli에서 수용성 형태로 발현되어 세포 lysate로 부터 정제되었다. 2. 각 융합단백질은 Balb/C 생쥐에 면역화 되었고, 그 결과 6개의 단일 크론 항체가 얻어졌으며, 이들 중 1B3와 7H8의 항원 epitope을 조사한 결과, 각각 preSl의 N-말단 1-2Oaa와 42-49aa를 인식하는 것으로 나타났다. 3. Single-chain immunoglobulin(ScIg)를 생산하기 위해 단일클론항체의 heavy chain variable영역은 linker에 의해 light chain variable 영역의 아미노말단과 공유결합에 의해 연결되었으며, C-말단을 γ1 constant의 hinge 영역에 융합시켰다. 4. 이것은 Chinese hamster ovary세포에서 dihydrofolate reductase 증폭과정에 의해 발현되었다. 항체를 안정적으로 발현하는 2E11 세포주가 선별되어 Protein G-sepharose에 의한 친화성 크로마토그래피로 세포 상층액으로 부터 정제되었다. 5. 2E11 항체의 항원결합 친화력은 ScIg의 모 항체인 chimeric 항체 CS131A 의 1/2 정도였다. 2E11과 CS131A의 PBS와 인간혈청에서의 열안 정성조사에서 2E11의 안정성과 활성이 PBS에서 보다 혈청에서 더 우수 한 것으로 나타났으며, 생리학적 온도에서는 CS131A와 거의 대등한 안정성을 나타냈다. 6. TR-FIA 개발을 위해 1B3와 ScIg을 europium chelate로 표지시켜 labelling yield를 조사한 결과, HBs 항원, lB3항체, 그리고 ScIg의 yield가 각각 0.98, 5.55, 3.36으로 나타났다. TR-FIA에 의한 HBs항원과 anti-HBs 항체 측정 감도는 2ng/well이었으며,. ELISA와의 상관관계는 각각 y=-76864.7+67553.9x(r=0.92)와 =-15.1+38.9x(r=0.94)로 나타났다. 7. ScIg와 IB3의 two-site sandwich법에 의한 TR-FIA에 의해 HBs 항원이 양성인 환자의 혈청에서 감염성 particle을 조사하였다. 그 결과 감염성 particle과 HBs항원 농도간에 서로 상관관계를 갖는 것으로 나타났다. 이들 결과는 ScIg와 anti-preSl 단일클론항체가 성공적으로 발현, 생산되었으며, 이들 항체를 이용한 HBs 항원과 anti-HBs 항체측정을 위한 TR-FIA는 RIA를 대치할 수 있는 안정된 높은 감도의 assay법인 것을 지적한다. We attempted to generate single-chain antibodies(Sclg) against the hepatitis B virus surface antigen(HBsAg) and to apply the antibodies for developing a time-resolved fluoroimmunoassay(TR-FIA) system. 1. Hepatitis B virus(HBV) preSl proteins fused with the maltose binding protein (MBP)-preSl(56) or the glutathione S-transferase (GST)-preS were expressed in E. coli and purified from the cell lysate. Each fusion proteins were immunized into Balb/C mice. 2. Six clones secreting a good amount of the mAb were isolated and characterized. Among them, the 1B3 and the 7H8 antibody recognized N-terminal 1-20aa and 42-49aa of the preS1 sequence, respectively. 3. We tried to create a ScIg maintaining the same specificity with the conventional mAb against the HBsAg. The heavy chain variable domains of the antibody was covalently joined to N-terminus of the light chain variable domain via synthetic linker The C-terminus of the light chain was then connected to the γ1 constant region by the hinge region. 4. The construct was then recombined with the expression vector pSGIG-S and expressed in Chinese hamster ovary cells using a procedure for dihydrofolate reductase amplification. 5. A clone (2E11) was selected and produced antibodies were purified from the culture supernatant by a Protein G affinity column. Antigen-binding affinity of the 2E11 was half of the parental chimeric antibody CS131A. 6. To develop a TR-FIA system, HBsAgs or ScIgs were conjugated with the europium chelate. This assay system was able to detect the HBsAg or the anti-HBs Ab at the level of 2ng/well, and showed a linear regression equation of y=-76864.7+67553.9x(r=0.92) or y=-15.1+38.9x(r=0.94) when compared with the measurements of 22 samples performed by a conventional ELISA method. 7. To further confirm practicality of the system, the patient sera were analyzed by TR-FIA based on two-site sandwich method of ScIg and anti-preS1 mAb (1B3). The concentration of infectious particle and HBsAg were shown to be well correlated with each other. These results indicated that the ScIg and the anti-preSl mAb were sucessfully generated, and the TR-FIA made of these antibodies was able to measure HBsAg or anti-HBsAb in a stable and sensitive manner.

      • 리스테리아 특이 iap 유전자(p60)의 대장균에서의 발현과 발현된 p60 단백질에 대한 단일클론항체의 생산

        이칠우 경기대학교 대학원 2000 국내석사

        RANK : 249691

        Listeria monocytogenes의 iap (invasion-associated protein) 유전자는 Listeria spp.의 주요 세포외 단백질인 p60을 암호화하고 있다. pMAL-c2 vector는 E. coli에서 L. monocytogenes의 p60 단백질을 발현시키고 정제하는데 용이하여 사용하였다. 이 vector에 존재하는 maltose binding protein (MBP) 융합단백질 발현계는 E. coli에서 재조합 단백질을 추출하고 얻기에 효과적인 도구이다. 본 연구에서 iap gene은 polymerase chaine reaction (PCR)에 의하여 L. monocytogenes의 게놈 DNA로부터 증폭하였으며, pMAL-c2 vector에 의하여 cloning되어 E. coli에서 발현되었다. 재조합 된 p60 단백질의 과발현은 0.3mM의 IPTG에 의하여 유도되었다. 발현양은 유도시간에 의하여 증가하였는데 정제를 위해 6시간이 최적의 유도 시간이었다. 이 재조합 단백질(MBP-p60/mono)은 amyloseresin column을 이용하여 정제되었다. BALB/c mouse는 L. monocytogenes의 p60에 대한 단일클론항체를 얻기 위해 정제된 MBP-p60/mono 단백질을 이용하여 면역시켰다. 그 결과 다른 미생물에는 반응하지 않지만 Listeria spp. 배양 상등액의 p60에 대하여 cross-reaction되는 여러 단일클론항체을 얻었다. 이들 단일클론항체 중에서 ID12 hybridoma는 L. monocytogenes에 대하여 특이적으로 반응하는 항체를 생산하였다. The iap(invasion-associated protein) gene of L. monocytogenes is encoding p60 that is major extracellular protein of Listeria spp.. pMAL-c2 vector was used cloning because it is easy to express p60 of L. monocytogenes in E. coli and isolate its protein. The maltose binding protein (MBP) fusion protein expression system existing in this vector is a powerful tool to produce and isolate recombinant proteins in E. coli. In this study, iap gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from genomic DNA of L. monocytogenes, it has been cloning by pMAL-c2 vector and expression in E. coli. The overexpression of recombinanted p60 was induced by 0.3mM IPTG. It was shown that the amount of expression was increased with inducing time and that 6 hours was optimal inducing time for the purification. The recombinant protein (MBP-p60/mono) had been pruified to use amylose resin column. BALB/c mouse were immunized with this protein to produce monoclonal antibody for p60 of L. monocytogenes. The result was that these monoclonal antibodies cross-reacted of p60 in supernatants of Listeria spp. cultured but didn't react to other microbe. 1D12 hybridoma producted monoclonal antibody that was specific reaction of L. monocytogenes among these monoconal antibodies.

      • 큰다리먼지진드기의 주요 알레르겐인 Der f 1에 대한 특이적인 단일클론항체 개발 및 이를 이용한 ELISA 키트 개발

        김지태 강원대학교 대학원 2021 국내박사

        RANK : 249690

        집먼지진드기는 알레르기성 비염, 천식 및 아토피 피부염 등의 알레르기 질환을 유발하는 대표적인 원인으로 알려져 있다. 현재까지 집먼지진드기 유래 알레르겐은 50가지 이상이 알려져 있으나 이중 큰다리먼지진드기의 Der f 1, Der f 2와 세로무늬먼지진드기의 Der p 1, Der p 2가 대표적인 중요한 알레르겐으로 알려져 있다. 집먼지진드기에 의해 유발된 알레르기질환 환자 중 80∼95%는 이 4가지 알레르겐에 의해 IgE가 과발현 되어 면역 반응을 통해 면역질환을 나타내는 것으로 보고되고 있다. 이중 Der f 1은 우리나라에서 우점종을 차지하고 있는 큰다리먼지진드기의 주요 알레르겐으로 Group 1 알레르겐인 cysteine protease 계열이다. 특히 Der f 1은 Der f 2에 비해 유전자서열의 다형성(polymorphism)이 적어 큰다리먼지진드기 유래 알레르겐을 파악하는 지표물질로 용이하다고 알려져 있다. 본 연구에서는 Der f 1에 대해 특이적인 단일클론항체를 개발하고 이 항체를 이용한 Der f 1 ELISA 키트를 개발 및 검증하고자 하였다. 먼저 큰다리먼지진드기의 사육 및 추출 과정을 통해 native Der f 1 (nDer f 1)을 확보하였다. 또한 Der f 1 유전자가 삽입되어 있는 벡터가 형질전환 되어 있는 Pichia 균주를 배양 정제하여 재조합 Der f 1 (rDer f 1)을 확보하였다. 확보한 rDer f 1을 항원으로 하여 하이브리도마를 제작하였으며 이후 rDer f 1 및 nDer f 1에 대해 모두 반응하는 단일클론항체를 선별하였고 이를 biotinylation 및 combination 시험을 통해 최종적으로 1차 항체 3D7과 2차 항체 13F7를 선별하였다. 두 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주는 한국세포주연구재단에 기탁번호 KCLRF-BP- 00486 및 KCLRF-BP-00487로 기탁하였다. 본 연구를 통해 개발된 항원과 항체를 이용한 Der f 1 ELISA 키트의 검출한계는 nDer f 1은 50 ng/ml 이었으며 rDer f 1은 2 pg/ml 이었다. 또한 현재 면역치료 및 알레르기 진단에 사용되는 4종류의 기허가 된 큰다리먼지진드기 알레르겐 정제 추출물을 대상으로 기존에 사용되고 있는 A사의 Der f 1 ELISA 키트와 비교한 결과, A사 키트의 Der f 1 값은 3.62∼20.59 ㎍/ml 이었고 본 연구에서 개발한 키트의 Der f 1 값은 3.72∼16.83 ㎍/ml 이었다. 두 분석 사이의 피어슨 상관 계수(Pearson Correlation Coefficient)는 0.1∼0.7로 두 키트간의 차이는 크게 없음을 확인하였다. 마지막으로 20개의 집먼지 샘플을 대상으로 측정한 Der f 1 농도는 A사 키트는 16.9∼429.0 ng/g먼지 였고 본 연구에서 개발한 키트는 14.6∼362.9 ng/g먼지 였다. 두 분석 사이의 피어슨 상관 계수는 0.9로 사용한 두 키트간의 차이는 없음을 확인하였다. 결론적으로, 본 연구에서는 Der f 1에 대해 정성 및 정량방식의 면역분석에 유용한 새로운 단일클론항체를 개발하였으며 이를 이용한 ELISA 키트는 Der f 1을 함유하고 있는 다양한 종류의 항원에 대해 기존 제품과 크게 차이가 없어 이를 대체하여 사용이 가능함을 확인 하였다. 그러므로 본 연구를 통해 얻어진 결과물들이 향후 국내 알레르기질환에 대한 새로운 진단기법 개발 및 면역치료제 개발에 있어 도움이 될 것이다. House dust mites are known to be a representative cause of allergic diseases such as allergic rhinitis, asthma and atopic dermatitis. Up to now, more than 50 kinds of allergens derived from house dust mites are known, but among them, Der f 1 and Der f 2 of Dermatophagoides farinae and Der p 1 and Der p 2 of Dermatophagoides pteonyssinus are known as the representative important allergens. It is reported that 80-95% of patients with allergic diseases caused by house dust mites have over expressed IgE by these four allergens, thereby indicating an immune disease through an immune response. Der f 1 is a major allergen of D. farinae that dominate in Korea, and is a group 1 allergen, cysteine ​​protease. In particular, Der f 1 has less polymorphism in the gene sequence than Der f 2, so it is known that it is easy to identify allergens derived from house dust mites. In this study, a specific monoclonal antibody for Der f 1 was developed, and then the ELISA kit was developed using this antibody. First, two antigens were obtained. One is native Der f 1 extracted from D. farinae and the other is recombinant Der f 1 purified from a Pichia strain transformed with a recombinant vector(Derf1-pPIC9). For Der f 1 specific mAbs, Hybridomas obtained after immunization with rDer f 1 as antigen and it were screened using ELISA and western blotting analysis. As a result, four monoclonal antibodies (1G8, 3D7, 13C5, and 13F7) were selected, and biotinylation and combination assays were confirmed. Finally, primary mAb 3D7 and secondary mAb 13F7 were selected. The detection limit of ELISA kit using mAb 3D7 and 13F7 were as low as 50 ng/mL on native Der f 1 and 2 pg/mL on rDer f 1. The developed ELISA kit was compared and tested with A company's Der f 1 ELISA kit on 4 commercialized D. farinae allergen extracts and 20 house dust samples. As a result, there was no significant difference in the Pearson correlation coefficient of the results obtained from the two kits. In conclusion, in this study, developed an ELISA kit and a novel mAb useful for the qualitative and quantitative immunoassay of Der f 1. Therefore, the results obtained through this study will be helpful in the development of new diagnosis and immunotherapy for allergic diseases in Korea in the future.

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