Purification Method of Recombinant Protein by Inverse Transtion Cycling & Development of Rapid Detection Method for Honeybee Fungal Disease : Inverse Transition Cycling을 이용한 재조합 단백질의 정제

이혜민 Graduate School Kyonggi University 2005 국내박사

ELPs(Elastin like polypeptides)는 elastin에서 유래된 biopolymer로서 Penta-peptide로 구성된 polypeptide이다. ELP는 역 전이 온도 Inverse transition temperature)를 가지고 있기에 융합 단백질이 포함된 용액의 온도가 Tt(Transition temperature)다 낮을 때에는 높은 용해도를 가지며 Tt보다 높을 때에는 polypeptide 사슬이 모여 침전을 이루게 하는 특성을 가지고 있다. 이러한 용해성은 원심분리 혹은 filtration에 의해 ELP와 결합한 목적 단백질의 정제를 가능하게 한다. ELP에 의한 경제 시 목적 단백질의 변성은 이루어지지 않으며 목적 단백질은 농축된다. ELP의 Tt는 ELP의 농도, ELP의 위치, 반복되는 peptide의 종류, ELP의 길이, NaCl의 농도 등에 의해 조절이 가능하다(Urry, 1992: 1997). 본 연구에서 사용된 ELP는 단백질 전사 시 Val-Pro-Gly-Val-Gly의 peptide 반복서열을 가지는 165 bp의 인공합성 DNA를 사용하여 in vitro ligation을 통해 얻어진 약 18kb의 polypeptide이다(하 등, 2005; Unpublished data). 확보된 ELP 유전자를 이용하여 목적 단백질의 경제를 도모하였고 목적 단백질과 ELP tag 사이에 삽입된 thrombin site를 이용하여 차후에 thrombin 절단 효소를 사용하여 융합 단백질에서 목적 단백질을 손쉽게 분리할 수 있도록 하였다. 본 연구에서 경계된 첫 번째 단백질은 세포내 주요 단백질로서 peptidyl-prolyl cis-trans isomerase(PPIase) 활성을 가지는 Cyclophilin 계 단백질 중의 하나인 Crclophilin F이다. Cyclophilin F은 미토콘드리아 내막과 외막 사이에서 물질의 이동을 담당하는 단백질로 세포 사멸과 자살기작과 관계가 깊은 것으로 알려져 있다(Crompton et al., 1998; Woodfield et al., 1998). 또한, 세포내 단백질의 합성과 물질의 이동, 신호 전달, 세포 주기 등 여러 가지 기작들을 위한 chaperons으로서의 기능도 밝혀졌다(Gothel and Marahiel, 1999; Kay, 1996; Rulten et at., 1999; Schiene and Fischer, 2000, Hunter, 1998; Yaffe et al., 1997). 융합단백질을 이용한 정제에 사용된 두 번째 단백질은 구제역을 일으키는 병원체인 FMDV의 주요 capsid 단백질인 VP1이다. FMDV type O형과 베트남에서 분리된 FMDV의 VP1 sequence를 바탕으로 합성된 유전자로 유전학 실험실에서 제공 받았다. 본 연구에서는 이러한 기능적 단백질의 대장균 내에서 과발현과 정제를 목적으로 하였으며, ELP 정제 시스템을 이용하였다. 각각의 단백질은 pQE30-Thr-ELP vector에 삽입되었으며, 대장균 세포에서 단백질 발현을 유도하였다. 이는 inclusion body의 형태로 발현되는 것이 확인되었으며, 1% SDS의 존재 하에서 해리시켰다. 여기에 1.3 M NaCl을 첨가하고 40℃의 Tt값으로 ITC정제가 가능함을 보여주었다. 융합 단백질의 ITC정제 시 횟수를 늘리면 순도가 강화되는 것을 확인하였고, 이는 실험실 내에서 손쉽게 대량의 단백질 정제를 다를 수 있다는 장점을 가진다. 꿀벌의 진군성 질병으로 잘 알려진 백묵병(Chalk brood disease)과 석고병(Stone brood disease)은 각각 Ascosphaera apis와 Aspergillus 속 균주가 원인균이다. 이러한 진균성 질병은 효과적인 치료 방법이 없으며 다른 꿀벌 질병의 2차 감염가능성의 위험으로 질병의 빠른 진단과 처리 방법이 시급한 실정이다. 본 연구에서는 백묵병과 석고병의 원인균의 18S rRNA유전자를 바탕으로 특이 primer쌍을 제작하였으며, 이는 PCR, Real-Time PCR로 검출방법을 확립하였고, 다른 꿀벌 질병의 원인균과 혼합하여 진단한 결과 primer의 특이성은 더욱 입증되었다. 한편, 꿀벌로부터 병원균의 검출 시 문제가 되는 초기 DNA의 양에 관한 문제를 해결하기 위해 제작된 진균의 universal primer는 시료로부터 병원균의 18S rRNA gene부분을 1차 증폭시키고, 증폭된 유전자를 바탕으로 2차 PCR을 가능하게 한다. 이는 특이 primer를 사용한 진단에서 검출 한계를 높일 수 있다는 것이 확인되었다. 또한, Real-Time PCR을 사용한 병원균의 진단방법은 초기 DNA의 양을 짐작할 수 있게 하였으며 이는 질병의 정확한 진단을 위한 유용한 방법으로 사용될 것으로 사료된다. Part Ⅰ. Establishment of Recombinant Protein Purification Method by Inverse Transition Cycling Elastin-like polypeptides (ELPs) undergo a reversible, inverse phase transition. Below their transition temperature (Tt), ELPs are soluble in water, but when the temperature is raised above Tt, phase transition occurs, leading to aggregation of the polypeptide. In this study, demonstrated a method for purification of soluble fusion proteins incorporating an ELP tag. Cyclophilin F and VP1 protein were expressed in E. coli as ELP fusion protein. These proteins have thrombin cleavage site and 11-ELP polymers in their C-terminal regions. Hence one-step purification of th fusion proteins is possible from cell extract by inverse transition cycling. Expressed Cyclophilin F- and VP1-ELP fusion proteins in E. coli were formed to inclusion bodies. Traditional methods to purify Inclusion bodies can be tedious and time-consuming. These methods require numerous solutions and length centrifugation times. Also, they need a following process for renaturation of proteins. In this study, new method for denaturation of inclusion bodies was used. That was final 1% of SDS add to the protein solution hen heating at 100℃ for 10 min. After cooling the solution at room-temperature, denatured proteins analysed by 10% SDS-PAGE gel. Proteins were compeletly denatured and existence in supernatant as soluble form. Then, recombinant proteins were purify by Inverse Transition Cycling. The purified ELP fusion protein was cleaved with thrombin to release the target protein from the ELP, which was seperated by an additional round of inverse transition cycling. The purified target proteins(VP1,Cyclophilin F) and ELP were characterized for size and purity by SDS-PAGE. Inverse transition cycling (ITC) is technically simple, fast, economical, and requires no specialized equipment or reagents. Separations can be completed in minutes using standard laboratory centrifuges and NaCl. Furthermore, these advantages can be realized over a wide range of purification scales. For micro-liter-scale expression and purification, ITC can be employed in parallel for high-throughput applications. Part Ⅱ. Development of Rapid Detection Methods for Honeybee Fungal Disease Chalkbrood and Stonebrood are well known fungal diseases of honeybee, those are caused by the fungus Ascosphaera apis and by several species of Aspergillus, respectively. Because there is no available control method for these kind of diseases, and because co-infection with other pathogens should be escaped, the rapid detection system will be important in hive management. In this study, Real-time PCR method for the rapid detection of chalkbrood and stonebrood was developed. Specific primer-pairs were designed based on the 18S rRNA gene of Ascosphaera apis and Aspergillus flavus. This PCR system could easily detect the existence of these pathogens from larvae samples. In addition, new universal primers were designed for amplification of the 18S rRNA gene from various fungi. It is also available for nested PCR with Ascosphaera apis and Aspergillus flavus specific primer-sets. Specific primer-pairs were designed based on the 18S rRNA gene of Ascosphaera apis and Aspergillus flavus. The unique fragments were amplified by each specific PCR primer pair; A. apis 18S SF/SR2, A. flavus 18S SF/SR. It improved sensitive diagnosis, enabling to detect 1 fg chromosomal DNA and 1 ag 18S rRNA gene cloned plasmid DNA. The specific PCR method, with improved sensitivity in the artificially contaminated templates, composed of chromosomal DNAs from P. larvae ATCC 9545, ATCC 25747, ATCC 25748, Melissococcus pluton, Bacillus subtilis, Paenibacillus alvei, Ascosphaera flava, Ascosphera atra, C. gloeosporioides, P. orizae and R. solani.

(The) development of private security in Mongolia : legal regulation and current condition

Lkhagvamaa, Galbat Kyonggi University 2016 국내박사

A legal regulation is one of the core regulations of private security to improve the professionalism of the sector and boosting public confidence in the private security industry. Although private security appears to be seen in almost all countries however, few studies have attempted to explore the regulations and historical significance of private security in global perspective. Most of researchers on private security have focused on Anglo-American countries. Very few of academic efforts have been made on countries, especially on Asian countries. Literature review suggested that there is lack of studies on development of private security in Mongolia especially comparative study of legal regulation on private security. The purpose of this study is to explore and analyze legislations in ancient and recent legislations regarding security and private security in Mongolia and to enhance its legal regulation in Mongolia by looking at the case of Mongolia. In addition, the study compares existing legislations between South Korea, The United Kingdom, Belgium and Mongolia, aiming to identify strengths and weaknesses of Mongolian legal regulations. While no research has been found with regard to the regulation of private security in Mongolia. For Mongolia, it is crucial to study experience of foreign countries, especially those where private security service has been developed well, in order to improve legal regulation of security service. This study also aims to analyze current conditions of private security in Mongolia. Study result illustrated the following findings: 1) despite the fact that there were legislations regarding security in ancient and previous time in Mongolia, there was not contemporary understanding of private security in Mongolia; 2) during the socialism, the policy of ensuring security was basically focused on protection of state property; 3) although, very first private security company was established in 1999, there was no legal environment of private security, until the Law on Contracted Private Security service was adopted in 2000; 4) the legal environment of private security is being governed by several different laws, as such there is a need to enhance its regulation by integrating them; 5) private security in Mongolia is being developed with the two types of security service including the proprietary security and the contract security; 6) since current research is very first research on private security in Mongolia, there is a need to conduct further research on private security serious of fundamental and applied research in this field. Based on the findings from comparison between four countries, therefore this study attempts to determine the approaches to enhance legal regulation of private security in Mongolia. The current research shall contribute to the development of the amendments to the legislation regarding the private security of Mongolia, and enhancement of the respective legal instruments. 법적 규제는 민간경비 산업분야의 전문성과 대중의 증가하는 공신력을 향상시키기 위한 민간경비의 핵심 규정 중 하나이다. 민간경비는 거의 대부분의 국가에서 볼 수 있음에도 불구하고, 아주 소수의 연구만이 글로벌한 관점에서 민간경비의 규제와 역사적 의미를 탐구하려고 했다. 대부분의 민간경비를 연구한 사람들은 영미국가에 초점을 맞추었고 아주 미세한 학문적인 성과만이 아시아 국가에서 이루어지고 있다. 몽골에서 민간경비발전에 대한 연구의 부족으로 학문적인 검토가 제안되었고 이 검토는 민간경비의 법적규제에 대한 비교연구가 그 내용이다. 이 연구의 목적은 몽골의 공경비와 민간경비의 대한 고대와 최근의 법률제정을 분석하고 탐구하며 유형을 찾아냄으로써 몽골의 법적규제를 강화하는 것이다. 또한, 이 연구는 몽골 법률 규정의 강점과 약점을 파악하는 것을 목표로, 한국, 영국, 벨기에와 몽골 사이의 기존 법규를 비교하였다. 몽골에서 민간경비의 법규에 관한 연구가 없기 때문에 보안서비스의 법적규제를 개선하기 위해 민간경비 서비스가 잘 발달된 다른 나라의 경험을 연구하는 것이 중요하다. 이 연구는 또한 몽골 민간경비 산업의 현재 상태를 분석하는 것을 목표로 하였다. 연구결과는 다음과 같은 결과를 보여준다. 1) 몽골 고대 이전시기의 보안에 관한 법령이 있다는 사실에도 불구하고, 동시대에 몽골 개인경비의 대한 이해가 없었다. 2) 사회주의 시대에는 안전을 보장하는 정책은 기본적으로 국가재산 보호에 초점을 맞추었다. 3) 최초의 민간경비회사는 1999년에 설립되었음에도 불구하고 계약경비서비스에관한법이 2000년에 채택될 때까지 민간경비에 대한 법적 규정은 없었다. 4) 민간경비의 법률 환경은 여러 가지 법칙에 의해 지배됨으로 이것들을 통합하여 강화할 필요가 있다. 5) 몽골의 민간경비는 전용경비와 계약경비를 포함한 두 가지 보안서비스 유형으로 발달하고 있다. 6) 현재 몽골에서 민간경비에 대한 연구는 최초 연구이기 때문에, 민간경비에 대한 중요하고 기본적인 요소들을 연구에 적용하여 향후 심도 있는 연구를 수행할 필요성이 있다. 네 국가 간의 비교결과에 따라, 본 연구는 몽골 민간경비산업의 법적 규제를 강화하고 정책을 결정하여 민간경비산업의 발전을 위한 연구를 고취할 수 있는 원동력이 될 것이다. 또한 이 연구는 몽골의 민간경비 관련법의 각각의 법적요소들을 강화함으로써 몽골의 보안 및 개선에 관한 법률개정에 기여할 수 있을 것이다.

Influence of Bypass Graft Shape on Wall Shear Stress of Coronary Artery

김웅 Graduate School Kyonggi University 2003 국내박사

동맥경화의 발생은 혈관내피세포의 손상으로 시작한 후 동맥경화가 진행되면 동맥의 중막에 콜레스테롤이 침착되어 점차 석회화 됨으로써 동맥벽이 비후되고 경화되는 비가역적 변성을 일으킨다. 결국 혈관내강의 좁아짐으로써 협착증으로 발달하게 된다. 관상동맥의 경우 일반적으로 협착율이 50% 일 때를 임계협착이라 부르며 이 경우에 혈관성형술 (angioplasty), 스텐트 (stent) 시술, 또는 본 연구에서 다루게 되는 관상동맥 우회로 수술 (coronary bypass surgery) 등이 필요하다. 관상동맥 우회로 수술 환자의 비교적 높은 조기 사망률은 우회로 접합부의 재협착 으로부터 야기된다고 알려져 있다. 본 연구에서는 우회로의 공간적 굽힘, 접합각도, 곡률반경 그리고 접합길이와 같은 기하학적 형상을 변화시켜 혈관 내부 유동의 특성과 혈관 재협착 가능성을 수치적으로 파악한다. 나아가 계산된 속도구배, 평균 전단응력 분포, 교번전단지수 (OSI) 등의 결과를 토대로 최적화된 우회로의 형상을 결정하게 된다. 본 연구에서 제시한 새로운 우회로 형상의 경우 재협착 가능성 판단의 지표가 되는 OSI값이 가장 낮게 나타났으며, 평균 전단응력은 감소한 반면 낮은 전단응력을 가지는 영역이 좁아져 속도 정체구간(velocity stagnation region)이 소멸되었다. 본 연구의 모든 결과는 단순히 역학적인 관점에서 수치적으로 해석한 것으로써 시술시 발생할 수 있는 여러 가지 생리학적인 문제점들은 고려하지 않았으며 상당 부분 이상화 되어있다. 궁극적인 생명연장의 꿈을 이루기 위해서는 앞으로 의학적인 실험이 수반되어야 할 것이다.

Women and Power on Byron's Poetry : 바이런의 시에 나타난 여성과 파워

김현생 Graduate College Kyonggi University 1999 국내박사

낭만주의 시인들 중에서 바이런(George Cordon, Lord Byron)은 개인의 자유에 대한 가장 열렬한 옹호자이다. 그는 여성에 대해서도 전통적인 여성관을 배격하고 남성과 마찬가지인 독립된 인격체로 보았다. 그에게 독립된 인격체로서의 여성은 대상이나 상품이 아니라 마음과 몸, 정신과 육체 그리고 영혼의 소유자인 것이다. 이는 여성을 성(性)으로 구분하기 전에 천부적으로 정신적·육체적 파워를 지닌 인간으로 본 열린 사고라 할 수 있다. 또한 인간을 사회적·정치적 동물로 정의하면, 여성도 당연히 사회의 구성원으로서 정치적 메커니즘에 참여할 수 있다는 것이 그의 지론이다. 본 논문에서 다룬 the Corsair의 걸네어(Gulnare), Beppo의 로라(Laura), The Two Foscari의 마리나(Marina), Cain의 에이더(Adah)와 이브(Eve), 그리고 Don Juan의 도나 아이네즈(Donna Inez), 쥴리아(Julia), 아데라인(Adeline), 하이디(Haide´e), 피츠퍼크(Fitz-Fulke), 걸베야즈(Gulbeyaz), 캐서린 여제(Catherine the Great), 레일라(Leila), 그리고 오로라(Aurora) 등의 여성인물들은 자신들만의 고유한 파워를 가지고 있다. 이들은 정신적으로 강하고 영적으로 통찰력이 깊고 지적으로 우월하다. 육체적으로 적극적이고 공격적이다. 정치적으로는 권력 지향적이다. 이들이 발휘하고 휘두르는 파워 앞에 상대 남성의 파워는 그 힘을 잃는다. The Corsair는 해적의 모험과 사랑을 다룬 로맨스이다. 이 작품에는 정신력이 강한 여성 걸네어가 등장한다. 그녀는 코세어(Corsair)가 파사(Pacha)의 궁을 습격했을 때 불타고 있는 하렘에서 구해준 파사의 노예이자 정부이다. 육체적으로 파사에게 매인 노예이지만 그녀의 정신은 강해서 파사를 죽이고 코세어를 감옥에서 구출한다. 이 과정에서 보여주는 그녀의 강한 의지력은 이 작품의 주인공인 코세어를 정신적으로 완벽하게 굴복시킨다. The Two Foscari는 바이런의 베니스 정치극 중의 하나이다. 이 극의 단 하나의 여성 인물 마리나는 베니스의 오래된 귀족, 포스카리 가문의 며느리로 젊은 포스카리의 아내이다. 음모, 계략, 권모술수, 협박, 고문 등이 난무하는 남성의 정치적 파워에 맞서 마리나는 굴하지 않고 자신의 도덕적 신념을 확고히 밀고 나간다. 정치적 음모에 패배하여 포스카리 가문의 두 남자를 잃고도 그녀는 결코 나약한 모습을 보이지 않는다. 이 모두가 그녀의 강한 정신력에서 나오는 파워 때문이다. Cain에 이르면 정신적, 특히 영적인 파워가 강한 여성 에이더를 보게 된다. 그녀는 케인(Cain)이 에이블(Abel)을 죽이고 이브의 추방 명령과 저주를 뒤로하고 황야로 쫓겨났을 때 기꺼이 케인을 따라나선다. 이러한 그녀의 모습에서 아무나 쉽게 할 수 없는 강한 희생 정신과 사랑을 보게 되는데 이 모두는 그녀의 내재된 영적인 파워의 영향이다. 바꾸어 말하면 그녀의 깊은 신앙에서 나온 통찰력이라 할 수 있다. Beppo의 여주인공인 로라는 성적인 매력이 넘치는 여성이다. 그녀의 육체적 파워 앞에 남편 베포(Beppo)의 남성적 파워는 무력해 진다. 남편이 그녀의 파워에 무릎을 끊고 멀리 떠나버리자 자신의 육체적 파워를 거리낌없이 발휘하면서 자신의 존재를 확인한다. 바이런의 유명한 설화시(narrative poem)인 Don Juan은 우주를 담고 있다해도 과언이 아니다. 사랑, 결혼, 철학, 전쟁, 바이런의 시학, 하늘 아래 새로울 것이 없는 그 모든 것을 담고 있다. 이 중에서 본 논문에서는 바이런의 대표적인 여성을 선택하여 그들이 보여주고 있는 정신적·육체적 그리고 정치적 파워에 대한 것을 다루었다. 돈 주안(Don Juan)은 그의 이름에 걸맞지 않게 이 작품 속의 여성 인물들이 휘두르는 정신적·육체적, 그리고 정치적 파워 앞에 한낱 노리개로 전락한다. 주안은 자신의 의지가 아니라 이 여성들의 파워에 휩쓸려 나아간다. 아이네즈와 아데라인은 지성을 갖춘 여성들이다. 그러나 그들의 지성은 위선과 기만으로 위장되어 지성의 진정한 의미를 의심케 한다. 로라가 솔직히 자신의 육체적 파워를 행사하였다면 줄리아는 그녀의 억압된 성을 사랑으로 미화하려다 오히려 실패한 예이다. 하이디는 순진한 여성의 육체적 파워를 나타내는 대표적 인물이다. 그녀의 열정적이나 무분별한 육체적 파워는 그녀 자신뿐 아니라 람브르(Lambro), 주안, 마지막으로 그녀가 살았던 섬 전체를 황폐화시키는 파괴적 파워이다. 걸베야즈와 캐서린 여제가 행사하는 정치적 파워는 그녀들의 육체적 파워와 어울려 정치와 성의 경계선을 모호하게 한다. 바이런은 여성의 성에 내포하고 있는 파괴적 요소를 전쟁과 결부시켜 그 위험성을 고발하고 있다. 이들 여성들의 정치적 파워는 그 위력에 있어 다른 어떤 파워보다 파괴적이다. 바이런은 이들의 정신적·육체적·정치적 파워를 결코 미화하거나 신비화하지 않고 있는 그대로 묘사하고 있다. 이러한 그의 시각에서 우리는 어떤 파워도 어떤 인간도 완벽할 수 없음을 깨닫게 된다. 그러나 이 모든 파워를 뛰어넘어 존재감조차 느낄 수 없는 강한 역설적 파워를 바이런은 오로라의 파워에서 제시하고 있다. 오로라는 그 이름이 암시하듯 북극의 극광처럼 초월적인 존재이다. 그녀는 존재하지 않는 듯, 파워가 없는 듯하면서 Don Juan의 모든 여성들의 파워를 제압한다. 그녀의 파워 앞에서 주안은 잃어버린 자신감을 회복한다. 이는 바로 역설적 파워로 설명할 수 있다. 그녀의 파워는 정신이나 육체 어느 면에서나 넘치지도 모자라지 않으며 각각의 파워를 조화롭게 균형을 이루어 보다 이상적인 파워를 만들어 낸다. 결국 바이런이 추구하고자 했던 여성의 이상적 파워란 정신과 육체의 조화에서 비롯된 균형 잡힌 파워임을 본 논문에서 결론으로 도출하였다. Of the major Romantic poets, Byron has been regarded as the most outstanding protector for freedom or liberty of the individual as well as society in every aspect. He has an open-mined idea about women, regarding women as not an object or commodity but as an individual who has mind and body. The links between "Women and Power" must not be denied if their power is to be truly manifested. It is shown to us how Byron's women review the exercise and shifts of power in various dramatized situations in his works. His women are mentally strong, spiritually intuitive, intellectually high-learned, physically aggressive, and politically power oriented. Their power, however, can be described in the forms of power as innate qualities that women are born with. Women in Byron's poetry perceive themselves, and may themselves become the emblem of power epitomized by mind, body, and politics. Therefore the structure of this thesis will be controlled by the tri-fold distinction between mental, bodily, and political power. It focuses on five works by Byron: an early work The Corsair, and then works of his self-exile: Beppo, The Two Foscari, Cain, and Don Juan. In each work, it is identified at least one powerful woman who is confronted by a critical situation; the action which the woman takes is as much determined by her internal power as by exterior circumstances. On the one hand, women occupy a certain socially behaved public role, on the other, their behavior is determined by the vital aspects of their most personal selves, that is, their power and conviction. It is examined how women's mental power in Gulnare of The Corsair, Marina of The Two Foscari, Adah of Cain and Donna Inez and Adeline of Don Juan found expression their own voice, and in particular how Byron came to see the negative element of women's power as a kind of mocking and satirizing. Gulnare, Marina, Adah, Donna Inez and Lady Adeline have strong mental power so that they can control the situation favorable for them and even govern all men in Byron's works. They are created out of the same materials, and are equal to one another in their firmness, self-reliance, and ability to see what really happens. But they are shown to exercise their mental power in slightly different modes. In them it is seen how the power of women's mind leads them to express themselves, directly or through a disguise, and to actively reach out. Bearing in mind that women's mental power is at once strong, fearful and abhorrent, it is shown in this thesis that Byron sets at odds those social and literacy conventions which are taboo in women. In describing his women, Byron shows us less-than-typical Romantic view of women's sexuality: his complete lack of puritanical censure, his complete faith in the healthy, life-giving force of free unrepressed sexual activity, his complete commitment to active, assertive, self-determined women, such as Laura in Beppo, Julia, Haide´e, Dudu`, and Fits-Fulke in Don Juan. In terms of examining political power in Byron's women and of following in his narrative footsteps, we see the fusion of women's mental and physical qualities and a group of politically powerful women. Eve in Cain primarily controls all the family with her political power in the domestic sphere, Gulbeyaz and Catherine the Great of Don Juan who are in the public sphere excercise their political power. Eve exercises a strong political power to judge Cain's murder. She has to suppress her maternal love to keep order in her family. On the contrary, Gulbeyaz and Catherine the Great uphold their own desires through their political power. Their political power is at times an instrument of affirmation of their lust. Women's political power mixed with lust is ridiculous enough, yet real and striking. On the basis of the poet's negative and mocking characterization in the fragmentary episode of English women such as Adeline and Fitz-Fulke and on the basis of the narrator's displacing and undermining attitude toward these women's latent but strong sexual power, it is a conclusion that the poet as well as the narrator in this English episode reconfirm the negative qualities of women's power, as they have done in the previous episodes and other poems. To make a conclusion to the unfinished Aurora is an ideal form of powers which is neither more, nor less. Therefore, Byron may have intended to develop women's power in a more positive manner, if he had had the chance. In this light, the incomplete Aurora's power in Don Juan is a paradox and suggests that her paradoxial power is the most balanced, perfect harmonized and ideal form of power among women's power.

The expression of Cdk inhibitors, p27^(kip1) and p57^(kip2), in mouse and human reproductive tissue

김성태 Graduate School Kyonggi University University 2003 국내박사

발생중인 개체의 세포의 증식은 CDKs (cyclin-dependent kinases)를 조절하기 위한 세포 내, 외의 복잡한 신호전달 과정들에 의해 조절된다. 정상적인 발생을 위해서는 서로 다른 cyclin-Cdks의 활성과 불활성을 통한 세포의 증식과 분화가 적절한 시기에 조절되는 것이 필수적이다. 자궁내막의 증식과 분화는 난소의 스테로이드 호르몬에 의해 조절된다고 알려져 있다. 난소의 에스트로겐은 선상피세포 (glandular cells)의 증식을 유도하는데 반해, 프로게스테론은 그것의 성장을 억제하며 분비샘으로의 변화를 유도한다. 태반은 포유류 배아발생과정에서 처음으로 형성되는 기관으로, 기능과 형성과정에 문제가 생기면 임신초기 유산과 임신 합병증을 일으킬 수 있다. 태반은 모체와 태아 사이에 위치하여 가스, 영양분 및 노폐물의 교환 등의 기능을 한다. 또한 임신과 관련된 호른몬, 성장인자의 공급처이며, 모체의 면역거부반응으로부터 태아를 보호해 주는 역할을 하고 있다. 따라서 포유류 배아의 발생을 위해서는 정상적인 기능을 할 수 있는 태반의 형성이 필수적이다. 포유류 정소의 세정관은 감수분열과 분화를 통해 정자를 형성하는 생식세포의 증식이 매우 복잡하고 다양하게 이루어지는 조직으로, 정상적인 발생을 위해서 매우 다양한 인자들에 의해 생식세포의 주기가 조절된다. 따라서 본 연구는 1) 생쥐의 발정주기와 임신기 동안 자궁내막에서, 2-1) 사람의 정상 생리주기와 자궁내막 증식증, 자궁내막암 조직의 자궁내막에서, 2-2) 체외배양을 통한 탈락막 유도 과정 중 사람의 자궁내막 기질세포에서, 3-1) 생쥐 태반의 성장과 분화과정에서, 3-2) 사람의 choriocarcinoma JEG-3 세포의 배양과정에서, 4) 생쥐 정소의 생후 발생과정에서, 5) 다양한 질환의 사람 정소조직에서 CDK inhibitor인, p27^(kip1)과 p57^(kip2)의 발현양상을 다음과 같은 조직에서 확인하고자 하였다: 그 결과는 다음과 같다: 1) 생쥐의 발정주기동안 p27^(kip1)과 p57^(kip2) mRNA의 발현은 발정기 (estrus)와 발정후기 (metestrus)보다는 발정전기 (proestrus)와 발정말기 (diestrus)에서 높게 나타났다. 발정말기에서 p57^(kip2)의 면역조직화학 결과, 탈락막 세포 또는 퇴화되는 기질세포의 일부분에서 강하게 염색되었다. 발정전기에서는 기질세포에서 전반적으로 강하게 p57^(kip2)가 염색되었다. 그러나 발정기에서는 p57^(kip2)가 매우 낮은 발색반응을 보였고, 발정후기에서는 탈락막세포에서 부분적으로 강하게 반응을 나타내었다. 발정주기와는 대조적으로 임신기 자궁내막에서는 p27^(kip1)과 p57^(kip2) mRNA level이 높게 유지되었다 (임신 5일 p27^(kip1)를 제외하고). p57^(kip2) 단백질은 임신 1일에서 2일까지는 비교적 적게 발현되다가 임신 3일과 4일에 일부 기질세포에서 비교적 강하게 발현되었다. 그리고 임신 5일에서 6일째에 이르러 탈락막세포에서 발현이 강하게 나타남을 확인하였다. 2) 사람의 생리주기동안 p57^(kip2) mRNA는 분비기에 증가하였고,자궁내막 증식증과 자궁내막암 조직에서는 생리주기의 증식기와 비슷한 수준으로 발현이 낮았다. 자궁내막 증식증과 자궁내막암 조직에서는 p57^(kip2) 단백질이 선상피세포와 기질세포 모두에서 거의 검출되지 않았다. 생리주기동안 선상피세포에서 p57^(kip2) 단백질의 발현은 초기 분비기에서 중기 분비기까지 유의하게 증가하였으나, 후기 분비기에서는 발현이 미약하였다. 기질세포에서는 후기분비기에서 보다 더 강한 염색을 확인하였다. 체외배양을 통한 탈락막유도 과정에서 p27^(kip1)과 p57^(kip2) mRNA 모두 점차 증가하는 양상을 나타내었다. 또한 프로게스테론에 의해서 p57^(kip2)는 발현이 증가되었다. 3) 생쥐의 태반에서 다른 그룹에 비해 임신 18일 태반에서 p27^(kip1) mRNA의 발현이 증가하였다. 반면 p57^(kip2) mRNA는 임신 18일 보다는 임신 12, 14, 16일에서 높은 발현을 보였다. 단백질 발현 양상은 mRNA와 유사하였는데, 특히 p57^(kip2) 단백질은 임신 14일 태반에서 높게 발현되었다. 면역조직화학 실험에서 p27^(kip1) 단백질은 임신 12일에서 18일까지 labyrinth zone에서 점차 증가하였다. 반면에 p57^(kip2) 단백질은 감소하는 경향을 나타내었다. 이러한 p27^(kip1)과 p57^(kip2)의 경향성은 decidua와 spongiotrophoblast에서도 나타났다. 4) 사람의 choriocarcinoma JEG-3 세포에서 p27^(kip1) mRNA는 에스트로겐 처리 농도에 상관없이 매우 약하게 발현되었고, p57^(kip2)는 발현되지 않았다. JEG-3 세포에 glucocorticoid인 dexamethasone (DEX)을 다양한 농도로 5일간 처리한 결과, 대조군에 비해 5 ng 처리군에서 p27^(kip1) mRNA 발현이 현저하게 증가하였다. 50 ng 처리군에서는 보다 더 증가하였으나, 500 ng 처리군에서는 50 ng 처리군보다 약간의 감소 현상을 보였다. 역시 p57^(kip2)는 발현되지 않았다. 5) 사춘기 (생후 28일)와 성체 생쥐보다는 미성숙 생쥐의 정소 (생후 7일, 14일)에서 p57^(kip2) mRNA의 발현이 유의하게 높았다. 생후 7일 정소에서 p57^(kip2) 단백질은 세정관 전체 생식세포와 체세포에서 광범위하게 발현되었다. 생후 14일 정소에서는 정원세포 (spermatogonia)에서, 사춘기 정소에서는 정원세포와 Leydig 세포에서 p57^(kip2)가 매우 강하게 발현되었다. 성체 생쥐의 정소에서는 아주 일부분의 정원세포와 Leydig 세포에서만 p57^(kip2) 단백질이 발현되었다. 6) 사람의 정상 정소에서 p57^(kip2)는 많은 정원세포에서 매우 강하게 발현되었다. 또한 비폐쇄성 무정자증 환자의 정소에서도 일부분의 정원세포에서 발현이 확인되었다. 감소된 정자형성 양상을 보인 정소에서는 p57^(kip2)가 정원세포에서 약하게 발현되었다. 하지만 Sertoli cell-only syndrome 환자와 정소암 환자의 조직에서는 p57^(kip2) 단백질의 발현을 확인할 수 없었다. 이러한 결과로 p27^(kip1)과 p57^(kip2)이 생쥐의 발정주기와 착상을 위한 자궁내막의 분화에 중요한 역할을 할 것으로 사료되며, 특히 p57^(kip2)은 착상의 유지를 위한 자궁내막의 분화에 결정적인 역할을 할 것으로 사료된다. 또한 이전 연구로 알려진 바에 덧붙여 p27^(kip1) 뿐만 아니라 p57^(kip2)도 사람의 생리주기동안 자궁내막 선상피세포와 기질세포의 증식억제와 분화에 관여할 것으로 사료되며, 특히 악성 종양화된 선상피세포의 성장 억제와 후기 분비기 기질세포의 탈락막화에 중요한 기능을 할 것으로 사료된다. 그리고 생쥐 태반 발생 과정에서 p27^(kip1)은 후반기 발달 과정에, p57^(kip2)는 중반기 발달 과정에 중요한 기능을 할 것으로 생각되며, p27^(kip1)은 사람의 choriocarcinoma 세포의 증식을 억제하는데 중요한 역할을 할 것으로 사료된다. 또한 생쥐의 생후 정소발달과정에 p57^(kip2)가 중요한 역할을 할 것으로 사료되며, 사람의 정소에서 정원세포의 분화와 악성종양 생식세포의 성장 억제에도 중요한 역할을 할 것으로 사료된다. Cell proliferation in a developing organism is controlled by a complex network of signaling pathway that integrate information from the extracellular and intracellular environments to regulate cyclin-dependent kinases. Regulation of cellular growth and differentiation through the activation and inactivation of different cyclin-Cdks (cyclin-dependent kinases) at appropriate times is needed for normal development. It is well known that proliferation and differentiation of the endometrium are controlled by ovarian steroids via their receptors. Oestrogen stimulates the proliferation of glandular cells, whereas progesterone inhibits their growth and induces secretory changes. The placenta is the first organ to form during mammalian embryogenesis. Problems in its formation and function underlie many aspects of early pregnancy loss and pregnancy complications. It acts as the interface between the fetal and maternal environments, and is needed for exchange of gases, nutrients and waste products between mother and fetus. In addition, the placenta acts as an important source of pregnancy-associated hormones and growth factors, and is involved in immune protection of the fetus. Therefore, the development of the mammalian embryo depends critically upon the formation of a functional placenta. The seminiferous epithelium of the mammalian testis is a complex and highly dynamic tissue in which germ cells proliferate, undergo meiosis and differentiate into spermatozoa. Cell cycle in these tissues is regulated by many different factors to normal development. Therefore, this study is to investigate the expression of CDK inhibitors, p27^(kip1) and p57^(kip2); 1) in mouse endometrium during the estrus cycle and pregnant period, 2-1) in human endometrium during the normal menstrual cycle and pathological tissues, endometrial hyperplasia and cancer, 2-2) in human endometrial stromal cells (ESC) during in vitro decidualization, 3-1) during the growth and differentiation of mouse placenta, 3-2) in human choriocarcinoma JEG-3 cells, 4) during the postnatal growth and differentiation of mouse testis, 5) in adult human testis with various defects. The results were obtained as follows: 1) p27^(kip1) and p57^(kip2) mRNA was highly expressed in diestrus and proestrus stage than estrus and metestrus stage. In diestrus stage, immunoreactivity of p57^(kip2) was heterogeneously strong in parts of decidualized or degenerated stromal cells. In proestrus stage, strong immunoreactivity p57^(kip2) was largely found in stromal cells. But, p57^(kip2) was showed low immunoreactivity in estrus stage. In metestrus stage, immunoreactivity of p57^(kip2) was heterogeneously strong in decidualized stromal cells. In comparison with estrus cycle, p27^(kip1) and p57^(kip2) mRNA level was highly maintained in gestational endometrium (except p27^(kip1) of day 5 p.c). p57^(kip2) protein level was relatively low from day 1 p.c. to day 2 p.c. In day 3 and 4 p.c., immunoreactivity of p57^(kip2) was strong in some endometrial stromal cells. In day 5 and 6 p.c., immunoreactivity of p57^(kip2) was strong in decidual cells. 2) During the menstrual cycle, mRNA level of p57^(kip2) was significantly increased in secretory phase. p57^(kip2) mRNA expression in endometrial hyperplasia and cancer was low as proliferative phase. Expression of p57^(kip2) protein was detected in neither glandular nor stromal cells at proliferative phase, endometrial hyperplasia and cancer. The expression of p57^(kip2) in glandular cells was significantly increased from early to mid-secretory phase, but was faint in late secretory phase. In stromal cells of late secretory phase, the intensity of the staining for p57^(kip2) was much stronger than that of early and mid-secretory phase. The ESC were cultured with E_(2)+P_(4) for up to 14 days. The mRNA level of p27_(kip1) and p57_(kip2) was gradually increased during in vitro decidualization. The p57_(kip2) in human ESC was dominantly up-regulated by progesterone in vitro culture. 3) The p27^(kip1) mRNA in mouse placenta was highly expressed in 18 days p.c. than that in other groups. But, p57^(kip2) mRNA expression was high in 12, 14, and 16 days p.c., then decreased in 18 days p.c. The p27^(kip1) protein expression pattern was similar to mRNA. But, p57^(kip2) expression was higher in 14 days p.c. than other groups. The p27^(kip1) protein in mouse placenta was gradually increased in labyrinth zone from 12 days to 18 days p.c. However, p57^(kip2) protein was slightly decreased in labyrinth zone from 12 days to 18 days p.c. These reverse patterns of p27^(kip1) and p57^(kip2) expression were also shown in decidua and spongiotrophoblast. 4) The p27^(kip1) mRNA expression was very low in human choriocarcinoma JEG-3 cells with estradiol concentration-independent manner. The p57^(kip2) mRNA was not detected in JEG-3 cells. The JEG-3 cells were treated with glucocorticoid dexamethasone (DEX) of various concentrations for 5 days. In 5 ng DEX-treated groups, p27^(kip1) mRNA was dramatically increased in comparison with control groups. Also p27^(kip1) was significantly increased in 50 ng DEX-treated groups in comparison with 5 ng DEX-treated groups. But, p27^(kip1) was slightly decreased in 500 ng DEX-treated groups. The p57^(kip2) was not also expressed in these groups. 5) The mRNA expression of p57^(kip2) was higher in immature (7 and 14 days after birth) testis than pubertal (28 days) or adult (50 days) mouse testis. In 7 days mouse testes, moderate p57^(kip2) immunoreactivity was largely found in spermatogenic and somatic cells in the seminiferous tubules. In 14 days mouse testes, intensive immunoreactivity of p57^(kip2) was found in spermatogonia. In pubertal mouse testes, p57^(kip2) immunoreactivity was very strong in nucleus of some spermatogonia and Leydig cells. Also in adult mouse testes, intensive immunoreactivity of p57^(kip2) was found in nucleus of some spermatogonia and Leydig cells. 6) In normal human testis, very intensive immunoreactivity of p57^(kip2) was found in nucleus of many spermatogonia. Also in non-obstructive azoospermic testis, some spermatogonia were strongly stained. In seminiferous tubule of spermatogenic hypoplasia, p57^(kip2) was weakly expressed in some spermatogonia. However, in the seminiferous tubule of Sertoli cell-only syndrome and testicular cancer patients, there was no visible sign of p57^(kip2) expression. These results suggest that p27^(kip1) and p57^(kip2) may play a role in endometrial differentiation for regular estrus cycle and implantation of mouse, and especially p57^(kip2) may play an essential role in endometrial differentiation for maintenance of implantation. Also p57^(kip2) as well as p27^(kip1) is involved in the growth suppression and differentiation of human endometrial glandular and stromal cells throughout the menstrual cycle, in growth inhibition of malignant glandular cells and in decidualization of stromal cells in late secretory phase. And these results suggest that p27^(kip1) may play a role in late period of mouse placental development and in growth inhibition of human choriocarcinoma cells, and p57^(kip2) may play a role in middle period of mouse placental development. These results suggest that the role of p57^(kip2) might be required for the postnatal development of mouse testis and that p57^(kip2) in human testis is involved in the differentiation of spermatogonia, and in growth inhibition of malignant germ cells.

Evaluation of Response Modification Factors for Special Steel Moment-Resisting Frames : 철골 연성 모멘트 골조의 반응수정계수 평가

강철규 Graduate College, Kyonggi University 2003 국내박사

현행 대부분의 내진설계기준에서, 설계 지진하중은 탄성하중을 반응수정계수(R)로 나누어서 저감된 설계 지진하중을 사용한다. 반응수정계수의 개념은 양호한 상세를 가진 내진 저항 시스템은 설계강도를 초과한 수평하중이 작용하더라도 붕괴되지 않고 연성적으로 비탄성 변형을 충분히 할 수 있다는 전제 조건하에 설정되었다. 그러나, 현행의 기준에서 제시된 반응수정계수의 합리성에 대해서는 많은 연구자들에 의해 의문시되어왔다. 본 논문의 목적은 내진설계 규준의 핵심 구성요소인 반응수정계수(R)의 체계적이고 합리적인 평가 방법을 제시하는 것이다. 본 논문에서의 반응수정계수는 단자유도 구조물에 대한 연성계수(R_(μ)), 다자유도 보정계수(R_(M)), 및 당도계수(R_(s))를 곱하여 산정하였다. 연성계수(R_(μ))는 지진하중을 받는 탄소성 단자유도(SDOF) 구조물의 목표 변위 연성비와 주기에 따른 비선형 동적해석으로부터 산정하였다. 연성계수의 체계적인 평가를 위하여 47개의 지진으로부터 총 1,860개의 지진기록을 수집하였다. 지진의 규모, 진앙거리 및 연약지반(Site E)을 제외한 토질조건은 연성계수에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 분석되었다 통계적 연구와 회귀분석으로부터 연성계수를 산정하기 위한 평가식이 제시되었다. 토질조건에 따라 제시된 연성계수 평가식은 상대적으로 간단하면서도 평균연성계수와 잘 일치하는 결과를 보여주었다. 다자유도(MDOF) 구조물의 영향을 고려하기 위한 다자유도 보정계수(R_(M))를 기존의 연구결과에 근거하여 제시하였으며, 제시된 다자유도 보정계수(R_(M))는 기존의 연구결과와 잘 일치하였다. 다자유도 구조물에 대한 연성계수는 단자유도 구조물에 대한 연성계수(R_(μ))와 다자유도의 영향을 고려하기 위한 보정계수(R_(M))를 곱하여 산정하였다. 단자유도 구조물에 대한 연성계수는 장주기 영역에서 일정한 값으로 수렴되어 목표변위 연성비에 접근하는 반면, 다자유도 구조물에 대한 연성계수는 급속하게 감소되었다. 강도계수(R_(s))와 반응수정계수(R)를 평가하기 위하여, 구조물의 층수(4, 8 및 16층), 토질조건(S_(A), S_(C) 및 S_(E)), 지진구역계수(Z=0.075, 0.2 몇 0.4), 골조 시스템(외곽골조 및 분배골조) 및 붕괴메카니즘(강기둥-약보 및 약기둥-강보)을 변수로 하여 총 108개의 원형구조물을 설계하였다. 강도계수(R_(s))는 구조물의 층수, 토질조건, 지진구역계수, 붕괴메카니즘, 지진하중 부담면적 및 중력하중에 대한 지진하중의 비율 등에 따라 상당한 영향을 받는 것으로 나타났다. 약기둥-강보(WCSB)의 설계조건을 만족하기 위한 예외 조건, 즉, 기둥에 있어서 P_(uc)<0.3F_(yc) A_(g)라는 조건은 설계 지진하중의 세기(Intensity)가 작은 지역에서는 부재 치수 결정에 중요한 역할을 하며, 큰 강도계수의 원인이 되는 것으로 나타났다. 하지만, 이 예외조건은 설계 지진하중의 세기(Intensity)가 큰 지역에서는 강도계수에 아무런 영향도 미치지 않는 것으로 나타났다. 반응수정계수(R)는 변위 연성비, 구조물의 층수, 토질조건, 지진구역계수, 붕괴 메카니즘, 지진하중의 부담면적 및 중력하중에 대한 지진하중의 비율 등에 따라서 많은 영향을 받는 것으로 나타났다. 약진 구역(Lower seismic design intensity range)에서는 지진하중의 세기(Design intensity)가 증가할수록 반응 수정계수가 감소하였으나, 강진 구역(Higher seismic design intensity range)에서는 근사적으로 일정한 값으로 수렴하는 형태를 보였다. 기준에서 제시하는 반응수정계수 값의 타당성을 분석하기 위하여 60개의 철골 원형 골조에 대하여 그 값을 검증하였다. 평균 반응수정계수는 강기둥-약보 외곽골조는 7.97, 강기둥-약보 분배골조는 9.93, 약기둥-강보 외곽골조는 4.13, 약기둥-강보 분배골조는 6.26으로 각각 평가되었다. 이 값은 기준에서 제시하는 8.5 값의 93.8%, 116.8%, 48.6%, 및 73.6%에 각각 해당된다. 따라서, 약기둥-강보 설계 개념은 일부 강진 지역에서 지진하중을 부담하기 위한 연성 모멘트 골조로는 부적절한 것으로 판단된다. 본 연구에서 증명된 바와 같이, 주어진 구조시스템에 대하여 많은 영향인자를 고려하지 않고 반응수정계수를 단일값(Single value)으로 사용하는 것은 부적절하다. 따라서, 모든 구조시스템에 대하여 요구성능(Desired performance) 및 동일한 수준의 안전성을 보장하기 위해서는, 본 연구에서와 같은 체계적이고 합리적인 방법으로 반응수정계수를 재평가하는 것이 필요하다. The design force levels currently specified by most seismic codes are calculated by dividing the base shear for elastic response by the response modification factor(R). The concept of a response modification factor has been proposed based on the premise that well-detailed seismic framing systems can sustain large inelastic deformations without collapse and develop lateral strengths in excess of their design strength. However, several researchers have expressed their concerns about the lack of rationality in the response modification factors( R) currently specified in seismic design codes. The main objective of this dissertation is to suggest the systematic and rational evaluation method of response modification factors(R) for special steel moment-resisting frames. The response modification factors are calculated by multiplying ductility factor( R_(μ) ) for SDOF systems, MDOF modification factor( R_(M)), and strength factor( R_(s) ) together. Ductility factors are computed for elastic perfectly plastic SDOF systems undergoing different level of inelastic deformation and period when subjected to a large number of recorded earthquake ground motions. To compute the ductility factor, a group of 1,860 ground motions recorded on a wide range of soil conditions during 47 different earthquakes are considered. It is shown that the effect of earthquake magnitude, epicentral distance, and site condition, except site E(soft soil), on ductility factor is negligible. Based on the results of regression analysis, simplified expressions are proposed to compute ductility factor. The proposed equations to compute site-dependent ductility factors are relatively simple and provide a good estimation of mean ductility factors derived from the statistical study presented herein. The MDOF modification factors( R_(M)) are also proposed to account for the MDOF systems, based on previous studies. The proposed MDOF modification factor( R_(M)) provides a good estimation of previous studies. The ductility factors for MDOF systems are determined by the product of Rμ and R_(M) which are the ductility factors for SDOF systems and the modification factor to account for the MDOF effects, respectively. It is shown that the ductility factors for SDOF systems in the long period range are approximately constant and approach the target displacement ductility ratios, while those of MDOF systems decrease rapidly. A total of 108 prototype steel frames are designed to investigate the strength factors and response modification factors considering the number of stories(4, 8 and 16-stories1, soil profiles(S_(A), S_(C) and S_(E)), seismic zone factors(Z=0.075, 0.2 and 0.4), framing systems(Perimeter Frames, PF and Distributed Frames, DF), and failure mechanisms(Strong- Column Weak- Beam, SCWB and Weak- Column Strong-Beam, WCSB). The strength factors are very significantly affected by the number of story, soil profile, seismic zone factor, failure mechanism, seismic tributary area, and the ratio of seismic loads to the gravity loads used in designs. The exception requirement to meet the WCSB, that is, columns with P_(uc)< 0.3F_(yc), A_(g), plays an important role in the determination of cross-sectional sizes and gives rise to a great strength factor in lower seismic design intensity ranges. However, this exception requirement has no influence for strength factors in higher seismic design intensity ranges. The response modification factors are significantly affected by the displacement ductility ratio, the number of story, soil profile, seismic zone factor, failure mechanism, seismic tributary area, and the ratio of seismic loads to the gravity loads used in the design. In lower seismic design intensity range, the more seismic design intensity increases, the more response modification factor decreases dramatically. However, in higher seismic design intensity range, the response modification factors are approximately constant. The verification of response modification factors for 60 prototype steel frames has been accomplished to investigate the reliability of assigned value by code. The mean values of the response modification factors are evaluated as 7.97, 9.93, 4.13, and 6.26 for SCWB PF, SCWB DF, WCSB PF, and WCSB DF models, respectively. These values are 93.8%, 116.8%, 48.6%, and 73.6% of the assigned value, that is 8.50, respectively. Therefore, it is judged that WCSB models are unsuitable for special moment-resisting frames to resist the lateral loadings, especially in higher seismic design intensity range. As demonstrated in this dissertation, a single value of response modification factors for all buildings of a given framing type, irrespective of above mentioned parameters, is inappropriate. Therefore, it is necessary to reassess the response modification factors, based on the systematic and rational manner like this dissertation to guarantee the desired performance or uniform level of safety for all seismic framing systems.

On some properties of mappings of surfaces : 곡면사상의 성질에 관한 소고

김홍현 Graduate School of Kyonggi University 2004 국내박사

현대 미분 기하학에서 곡선과 곡면에 대한 연구가 차지하는 비중은 매우 크다. 특히 곡면의 분류에 관한 연구는 그 자체로서도 매우 흥미로울 뿐만 아니라 Riemann 기하학의 연구에 토대가 된다. 방향 도함수(directional derivative)가 그 vector part에 관하여 선형이 된다는 사실과, 벡터장(vector field)의 미분 즉 covariant derivative를 이용하여 Euclid 공간에서 정의된 사상의 도함수 즉 tangent map이 선형사상이 된다는 것은 매우 잘 알려진 사실이다. 본 논문에서는 곡면에 대한 정의와 다양한 곡면의 예를 소개 하였고, Euclid건 공간에서 정의된 여러 가지 사실을 바탕으로 곡면에서 정의된 사상을 소개하고 그 사상의 미분이 선형사상이 됨을 증명하였다.

On the Intrinsic Geometry of Surfaces : 곡면의 내재적 기하학에 관한 소고

민영길 Graduate School of Kyonggi University 2004 국내박사

곡면의 국부적인 성질을 연구하는데 제1기본형식은 매우 중요한 역할을 한다. 특히 곡면의 많은 국부적 성질들은 제1기본형식에 의하여 표현될 수 있음 은 매우 잘 알려진 사실이다. 이러한 성질에 대한 연구를 곡면의 내재적기하학이라 하며 곡면에 대한 연구에서 매우 중요하다. 본 논문에서는 국부 등거리변환(local isometry)의 여러 성질과 그 응용에 대하여 연구하였다. 2장에서는 곡면과 곡면변환 그리고 변환의 미분에 관한 기본적 개념을 소개하였고, 3장에서는 이러한 성질을 이용하여 본 논문의 주 정리를 증명하였다.

On the Properties of Integral Domains : 정역의 성질들에 관한 연구

양윤정 Graduate School of Education, Kyonggi University 2002 국내박사

정역은 단위원을 가지고 있으나 영인자(divisors of zero)를 갖지 않는 가환환을 말한다. 현대 대수의 중요한 일부분을 차지하고 있는 정역을 단순하게 고찰해 보면, 정역은 정수의 집합 Z에서 유래한다. 따라서 정역은 정수 집합이 갖는 많은 성질들과 유사한 성질을 갖고 있음을 추론해 볼 수 있다. 반면에 체는 가환인 division ring을 말한다. 따라서 체에서 영이 아닌 모든 원소는 곱에 관한 역원을 갖는다. 체는 대수 체계에서 가장 강력한 구조를 갖고 있으며, 체의 성질들은 중·고등학교 수학교육 과정에서 널리 활용되고 있다. 위 두 사실을 비교해 볼 때 체와 정역의 차이점은 영이 아닌 모든 원소에 대해 곱에 관한 역원이 존재하느냐 존재하지 않느냐에 달려있다는 것을 알 수 있다. 본 논문에서는 위 사실을 바탕으로 정역, 체, 가환환, division ring 사이의 관계와 성질들을 조사하며 주어진 정역으로부터 분수체를 구성해 보고 이 분수체가 주어진 정역을 포함하는 가장 작은 체라는 것을 밝히고자 한다.

Expression and Purification of Recombinant ELP-fusion Proteins formed Inclusion body in E. coli & Establishment of Real-Time PCR and High-Speed Real-Time PCR for Diagnosis of American Foulbrood : 미국부저병의 원인균인 Paenibacillus lavae subspecies larvae의 진단을 위한 Real-time PCR

이도부 Graduate School of Kyonggi University 2005 국내박사

PART Ⅰ ELPs (Elastin like polypeptides)는 elastin에서 유래된 biopolymer로서 penta-peptide로 구성된 polypeptide이다. ELP는 역 전이 온도를 가지고 있기에 융합단백질이 포함된 용액의 온도가 Tt보다 낮을 때에는 높은 용해도를 가지며 Tt보다 높을 때에는 polypeptide 사슬이 모여 침전을 이루게 하는 특성을 가지고 있다. 이러한 용해성은 원심분리 혹은 filtration에 의해 ELP와 결합한 목적 단백질의 정제를 가능하게 한다. ELP에 의한 정제 시 목적 단백질의 변성은 이루어지지 않으며 목적단백질은 농축된다. ELP의 Tt는 ELP의 농도, ELP의 위치, NaCl의 농도에 의해 조절이 가능하다. 본 연구에서는 이러한 ELP의 특성을 SPKA2, mouse IgG CH, VTGsdAb의 발현 및 정제에 적용하였다. ELP와 융합된 형태의 이들 단백질들은 모두 봉입체 형태로써 과발현이 유도되었다. 봉입체의 해리를 위하여 1% SDS를 사용하였으며, TCA 침전을 통하여 SDS를 제거할 수 있었다. 강력한 세정제에 의한 완전한 해리 이후에도 ELP의 특성은 변하지 않았으며 ITC 정제를 사용하여 목적 단백질을 순수 분리할 수 있었다. 본 연구에서 얻어낸 결과들은 다양한 단백질에 대한 ELP의 적용 가능성 이외에도 봉입체 형성 단백질의 정제법에 있어서 보다 간단하고 빠른 방법을 제시할 수 있음을 보여주고 있다. PART Ⅱ 다양한 질병의 신속한 진단에 있어, Real-Time PCR을 이용한 진단법은 정확성, 특이성, 민감성, 신속성 등의 신속진단법의 요건을 두루 갖추고 있다. 이러한 장점을 이용하기위해 Real-Time PCR을 꿀벌의 질병중 하나인 미국부저병 신속 진단법의 개발에 적용하였다. 미국부저병을 일으키는 Paenibacillus larvae subspecies larvae의 16s ribosomal DNA 특이 염기서열을 primer 16sNF/16sNR로 사용한 Real-Time PCR 진단법은 2×10개의 DNA까지 검출이 가능한 것으로 나타났으며, C_(T)값의 계산과 Tm의 계산으로 PCR 이후 전기영동에 의한 분석에 준하는 정확성을 보여 주었고 초기 template에 대한 뛰어난 정량성이 확인되었으며, 이는 타 균주의 DNA와 혼합된 시료에서 병원균의 양을 정확히 추산할 수 있는 가능성을 제시하였다. 또한 질병의 진단시간의 감소에 초점을 맞추어 High-Speed Real-Time PCR 진단법을 확립하였으며, 그 결과 총 반응시간 17분 만에 2×10^(3)개의 DNA를 검출 할 수 있는 Real-Time PCR 진단법을 확립할 수 있었다. 이로써 미국부저병의 진단은 물론, 국내 봉군에 잠재되어 있는 것으로 예상되는 P. larvae sups. larvae의 포자의 양의 수준, 나아가 발병가능성의 예측도 가능하리라 기대되며 High-Speed Real-Time 진단법의 신속성은 AFB 진단법에 있어서 커다란 이점을 가져오리라 기대된다. Part Ⅰ Expression and Purification of Recombinant ELP-Fusion Proteins formed Inclusion Body in E. coli. Elastin-like polypeptides (ELPs) are environmentally responsive biopolymers based on elastin derived pentapeptide repeat Val-Pro-Gly-Val-Gly. Below their transition temperature (Tt), the polypeptides are soluble in aqueous solution. however, when the temperature is raised above Tt, the hydrated polypeptide chains hydrophobically collapse and aggregate, forming a separate, ELP-rich phase. A gene for a typical ELP fusion protein includes three components (Target protein, linker sequence, ELP gene). The position of ELP gene may depend on the properties of the target protein. If the target protein is known to express at a high level, it may be preferable to fuse the ELP to the C-terminals. C-terminal ELP fusion may be preferable because it is translated after synthesis of the target protein is completed. But, N-terminal ELP tag has been observed to increase the soluble expression of a poorly expressed target protein. In this study, the SPKA2, the mouse IgG CH and VTGsdAb were expressed and purified with ELP-tag. Most of expressed proteins were formed inclusion bodies and denatured in the buffer containing 1% SDS. Compare with other purification methods, ELP-tag offers a simple and rapid means for the purification of target proteins. Also, no change in activity of ELP was observed in denaturing buffer. This result may be suggested to purification methods of inclusion bodies. Part Ⅱ. Establishment of the Real-Time PCR and the High-Speed Real-Time PCR for Diagnosis of American Foulbrood In the diagnosis of various diseases, Real-Time PCR satisfies requirements of rapid detection method, such as accuracy, specificity, sensitivity, and rapidity. To take these advantages, Real-Time PCR was applied to develope the rapid detection method for one of honeybee diseases, American Foulbrood (AFB). Real-Time PCR detection method with 16s ribosomal DNA-specific primer set, 16sNF/16sNR of Paenibacillus larvae subspecies larvae, the pathogen of AFB, has higher sensitivity than conventional PCR detection method, enabling to detect 10^(-1)fg DNA of the bacteria. Also, High-Speed Real-Time method has the seventeen minute in total reaction time. This result is the fastest detection time comparing with those of predeveloped AFB PCR detection methods from our laboratory. From this result, shortening the detection time in AFB diagnosis could induce a strong advance in this field.